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P物质放免试剂盒操作说明书

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  • 2025年07月05日
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      SPkit

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    P物质放免试剂盒操作说明书
    S.PHY-10171RIA KIT
    P物质(S.P)为脑肠肽,分子量为1347,广泛分布于神经系统和胃肠系统,由APUD系统的EC1肠嗜铬细胞分泌。S.P具有多种生理功能,能够刺激和加速胃肠蠕动,刺激唾液和胰腺分泌,减少胆汁分泌,刺激生长抑素、胰岛素和高糖素的释放,同时,S.P还具有神经递质和调制因子的作用。本测定盒用于血浆提取液、组织提取液,脑脊液中S.P含量的测定。
    盒组成及配制:冻干品于-20℃保存,溶解后允许冻融一次。液体试剂4℃保存。
    1、缓冲液1瓶。
    2、免疫沉淀剂(第二抗体)1瓶。
    3、生理盐水(含0.5% BSA):自备。
    4、抑肽酶1瓶 10%EDTA-Na2,自备。
    5、标准品2瓶:1024pg/瓶,用前加缓冲液 1 ml/瓶溶解,然后倍比稀释成浓度
    为1024、25 6、128、64、32、16、8pg/ml的标准。
    6、S.P抗体 2瓶。
    7、125I - S.P 2 瓶。
    8、牛血清白蛋白0.5克。
    P物质放免试剂盒操作说明书样品收集:
    静脉血3ml ,注入含0.5M EDTA-Na2 30ul和抑肽酶1500 KIU试管中 混匀,
    离心血浆放-20℃保存,测前提取或提取后再置-20℃贮存。
    血浆提取:
    每1ml血浆加2ml 冷丙酮(4℃±),混匀,4℃离心,2000转×20分钟。取
    上清加4ml冷石油醚,混匀后再次离心。吸弃上相,下相用凉风(空调或电扇)将残
    余丙酮吹掉后所余液体用冷冻抽干机抽干。亦可用氮气或多头吹干器吹干。干燥后密
    封保存(4℃可存一周,-20℃可保存2—3月)提取管(瓶)不能用塑料管(瓶)!!!
    P物质放免试剂盒操作说明书组织的提取:
    取大小适宜的组织快,立即称重于煮沸的生理盐水(1ml)中煮沸3 分再加1N冰
    醋酸0.5ml于匀浆器中匀浆提取,再用1N NaOH 0.5 ml中和,3000转/分,15分钟(最
    好是低温离心)。取上清液贮存于-20℃以下待测,可保存2-3个月)。
    注意事项:
    本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液/瓶稀释
    本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液/瓶稀释
    本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
    操作步骤:提取冻干的血浆样品加生理盐水(含0.5% BSA )0.5ml溶解。
    S.P RIA加液程序 (单位:ul )
    ————————————————————————————————
    试 剂 T NSB S0 S1 ~ S8 待测样本
    ————————————————————————————————
    标 准 品 —— —— —— 100 ——
    待测样本 —— —— —— —— 200
    抗 体 —— —— 100 100 100
    缓 冲 液 —— 300 200 100 ——
    ———————————————————————————————
    充分混匀,4℃ 放置24小时
    ———————————————————————————————
    125I- S.P 100 100 100 100 100
    ———————————————————————————————
    摇匀4℃ 放置24小时
    ———————————————————————————————
    分 离 剂 —— 500 500 500 500
    ———————————————————————————————
    混匀,室温放置15分钟后,离心 3000转/分 15分钟,弃上清,测定各管沉淀cpm数。
    P物质放免试剂盒操作说明书结果计算:
    1. 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。以各标准管B/B0%与各标准管浓度的对数绘制曲线图,在图上查出各标本及回收管含量。
    2. 血浆样本测值÷4=待测血浆样本的 S.P含量(pg/ml)(“4”为容积校正系数)
    组织样本测值÷2=待测组织提取液S.P含量(pg/ml)。
    3. 正常值:42.97±7.7 pg/ml。
    本月药盒参考数据:
    —————————————————————————————————————————
    T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
    —————————————————————————————————————————
    CPM
    —————————————————————————————————————————
    N/T% B0/T% B/ B0 %
    —————————————————————————————————————————中文名称:牛粘蛋白1(MUC1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称:ELISA Kit for Mucin 1 (MUC1)
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        高效转染试剂说明书.pdf       关于百恩维生物  

    • 实验操作

      ,不能得到足够的菌量来抽提质粒,摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型,导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多:容易导致裂解不充分,且容易超过硅胶膜柱的承载上限,最终使得质粒提取效率降低,建议参考提取试剂建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当:比如在加入缓冲液重悬菌体时,菌体没有充分分散悬浮,导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解,可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂(QIAGEN 质粒提取试剂中均有配备 LyseBlue 指示剂),均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用

    • CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting

      %;2. 72 h 后收集细胞提取基因组 DNA(按照基因组 DNA 提取试剂说明书操作);3. 使用事先设计好的引物进行 PCR 扩增,这里使用的酶是 NEB 公司的 Q5 high-fidelity Polymerase,一切按照该酶的说明书严格操作;4. 将目的条带切割下来并使用胶回收试剂回收 DNA 条带,一切按照胶回收试剂说明书进行操作;5. 回收后的 DNA 样本,经 T7 Endonuclease I 酶解验证错配 DNA,部分结果如下:T7 EI验证成功,开始正式实验时间飞逝,上次说

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