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文献和实验学:在微分干涉显微镜下观察肠道类器官。类器官大小约为0.2-2mm,呈芽状结构,具有中央管腔和上皮细胞层。 ②细胞计数:使用血细胞计数板或细胞计数仪进行细胞计数。将类器官从基质胶中解离后,用4℃磷酸盐缓冲液(PBS)或高级DMEM/F12培养基冲洗。用乙2胺4乙酸(EDTA)分散细胞,用高级DMEM/F12洗涤2次,然后用血细胞计数板或细胞计数仪计数。 ③多种细胞类型(免疫细胞化学和免疫荧光染色):用4%多聚甲醛(PFA)固定肠道类器官。将完整类器官或切片(冷冻或石蜡包埋)用0.1%TritonX
显微镜、透明质酸酶、移液管、工作液、M16溶液(Sigma)、3ml注射器等。5.DNA显微注射用器材(1) 受精卵的收集与移动用器材:巴氏移液管、酒精灯、特制吸管、玻璃刀等。(2) 凹玻片准备:一块标准的凹型载玻片(硅化)、矿物油(Sigma)、工作液等。(3) 注射设备的设置:微型水力驱动设备、Hamilton Gas-Tite™注射器(250 l)、Intramedic™管道系统(外径1.27mm,内径0.86mm)、两只玻璃管道连接头、三通管连接器、一只带接头的60ml塑料注射器、一只器械
化碳的含量、温度和湿度,培养物置于孵育箱内阁,孵育一定时间后可直接观察生长结果。 (2)烛缸培养法:取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器,将接种好的培养基放入缸内,点燃蜡烛后放在缸内稍高于培养物的位置上,缸盖或缸口均涂以凡士林,加盖密闭。因缸内蜡烛燃烧氧逐渐减少,数分钟后蜡烛自行熄灭,此时容器内二氧化碳含量约占5%~10%。将缸置于35℃普通孵育箱内孵育。 (3)气袋法:选用无毒透明的塑料袋,将已接种标本的培养皿放入袋内,尽量祛除袋内空气后将开口处折叠并用弹簧夹夹紧袋口。使袋呈密闭状态,执断袋内已置
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