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文献和实验显微镜、透明质酸酶、移液管、工作液、M16溶液(Sigma)、3ml注射器等。5.DNA显微注射用器材(1) 受精卵的收集与移动用器材:巴氏移液管、酒精灯、特制吸管、玻璃刀等。(2) 凹玻片准备:一块标准的凹型载玻片(硅化)、矿物油(Sigma)、工作液等。(3) 注射设备的设置:微型水力驱动设备、Hamilton Gas-Tite™注射器(250 l)、Intramedic™管道系统(外径1.27mm,内径0.86mm)、两只玻璃管道连接头、三通管连接器、一只带接头的60ml塑料注射器、一只器械
化碳的含量、温度和湿度,培养物置于孵育箱内阁,孵育一定时间后可直接观察生长结果。 (2)烛缸培养法:取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器,将接种好的培养基放入缸内,点燃蜡烛后放在缸内稍高于培养物的位置上,缸盖或缸口均涂以凡士林,加盖密闭。因缸内蜡烛燃烧氧逐渐减少,数分钟后蜡烛自行熄灭,此时容器内二氧化碳含量约占5%~10%。将缸置于35℃普通孵育箱内孵育。 (3)气袋法:选用无毒透明的塑料袋,将已接种标本的培养皿放入袋内,尽量祛除袋内空气后将开口处折叠并用弹簧夹夹紧袋口。使袋呈密闭状态,执断袋内已置
细胞的胰蛋白酶注入50ml锥形离心管中,加入小牛血清2ml终止酶反应。再以30ml PBS冲洗管腔,流出液一并入离心管,1000r/min离心10min,弃上清,加入含有10%小牛血清的DMEM [或IMDM(Dibco)?]培养液,充分混合制成细胞悬液。取0.1ml细胞悬液在血细胞计数板计数。最后调细胞数,以1×105/ml接种至24孔培养板中,每孔1ml。置于5%CO2,37℃静止培养24h更换培养液,以除去未贴壁的细胞。以后每隔2d换液1次,以维持细胞的营养和内环境的稳定。 胰蛋白酶溶液(100
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