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- 2025年12月27日
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文献和实验Steady State ATPase Assays Coupled Enzyme System
Motor protein (>95% purity; 15-20 µM) Cuvettes (200 µL volume, 10 mm path length) 0.5 M Tris-OAc, pH 7.5 10 mM MgCl2 10 mM DTT
；6. 4000 rpm，4 ℃ 离心 10 min 回收细胞，弃上清，每 50 mL 原培养物再加入 2 mL 冰冷 100 mM CaCl2 溶液悬浮细胞；7. 按每份 200? 滋 l 分装，4 ℃ 可保存 1~2 周。若需长期保存，可加甘油至终浓度为 15%，置-70 ℃ 备用。【注意事项】大肠杆菌必须从 LB 培养基琼脂平板上获得单菌落，37 ℃ 过夜培养 12～16 h，第二天按 1～5% 接种，直至 A600 值为 0.5～0.6；（二）重组质粒的转化1. 将感受态细胞置冰上融化，然后加
2～4 h，使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连； 免疫沉淀反应后，在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3～4 次；最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液，沸水煮 5 分钟； SDS-PAGE，Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
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