人抗软骨抗体(anti-cartilage-Ab) 检测试

人抗软骨抗体(anti-cartilage-Ab)

检测试剂盒

本试剂仅供研究使用

试验原理：

anti-cartilage-Ab试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知anti-cartilage-Ab浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将anti-cartilage-Ab物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中anti-cartilage-Ab的活性浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

自备材料

1． 蒸馏水。

2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3． 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。

性能

1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

结果 判 断 与 分 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的anti-cartilage-Ab标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的anti-cartilage-Ab含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/ml
中文名称：小鼠70kDa热休克蛋白5(HSPA5)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 5 (HSPA5)
中文名称：小鼠激活T-细胞核因子1(NFATC1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Nuclear Factor Of Activated T-Cells,
中文名称：小鼠Osterix蛋白(OSX)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Osterix (OSX)
中文名称：小鼠溶血磷脂酸受体3(LPAR3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Lysophosphatidic Acid Receptor 3 (LPAR3)
中文名称：小鼠胸腺旁腺素(PTMS)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Pa英文名称：Rathymosin (PTMS)
中文名称：小鼠脂解激活脂蛋白受体(LSR)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Lipolysis Stimulated Lipoprotein Receptor (LSR)
中文名称：小鼠肌球蛋白重链4(MYH4)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Myosin Heavy Chain 4, Skeletal Muscle (MYH4)
中文名称：小鼠细胞程序性死亡蛋白1配体1(PDCD1LG1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Programmed Cell Death Protein 1 Ligand
中文名称：小鼠同种异体移植炎症因子1(AIF1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Allograft Inflammatory Factor 1 (AIF1)
中文名称：小鼠黄嘌呤脱氢酶(XDH)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Xanthine Dehydrogenase (XDH)
中文名称：小鼠亚硫酸盐氧化酶(SUOX)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Sulfite Oxidase (SUOX)
中文名称：小鼠血小板反应蛋白4(THBS4)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Thrombospondin 4 (THBS4)
中文名称：小鼠血小板反应蛋白3(THBS3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Thrombospondin 3 (THBS3)
中文名称：小鼠外周鞘磷脂蛋白22(PMP22)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Peripheral Myelin Protein 22 (PMP22)
中文名称：小鼠1号染色体开放阅读框85(C1orf85)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Chromosome 1 Open Reading Frame 85 (C1orf85)
中文名称：小鼠脂素1(LPIN1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Lipin 1 (LPIN1)
中文名称：小鼠卵泡抑素样蛋白3(FSTL3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Follistatin Like Protein 3 (FSTL3)
中文名称：小鼠神经肽Y受体Y2(NPY2R)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Neuropeptide Y Receptor Y2 (NPY2R)
中文名称：小鼠神经肽Y受体Y1(NPY1R)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Neuropeptide Y Receptor Y1 (NPY1R)
中文名称：小鼠白三烯A4水解酶(LTA4H)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Leukotriene A4 Hydrolase (LTA4H)
中文名称：小鼠肽聚糖识别蛋白1(PGLYRP1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Peptidoglycan Recognition Protein 1 (PGLYRP1)
中文名称：小鼠野鼠色基因相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Agouti Related Protein (AGRP)
中文名称：小鼠前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Procollagen C Proteinase Enhancer 1 (PCPE1)
中文名称：小鼠肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Ligand
中文名称：小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Fibroblast Activation Protein Alpha (FAPa)
中文名称：小鼠卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Lecithin Cholesterol Acyltransferase (LCAT)
中文名称：小鼠白介素6受体(IL6R)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interleukin 6 Receptor (IL6R)
中文名称：小鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPX)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Eosinophil Peroxidase (EPX)
中文名称：小鼠复制启动因子1(REPIN1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Replication Initiator 1 (REPIN1)
中文名称：小鼠转录激活因子3(ATF3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Activating Transcription Factor 3 (ATF3)
中文名称：小鼠钠/钾离子转运ATP酶β3肽(ATP1β3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for ATPase, Na+/K+ Transporting Beta 3 Polypeptide
中文名称：小鼠儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Catechol-O-Methyltransferase (COMT)
中文名称：小鼠Ⅻ型胶原(COL12)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Collagen Type XII (COL12)
中文名称：小鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Ki-67 Protein (Ki67P)
中文名称：小鼠双糖链蛋白聚糖(BGN)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Biglycan (BGN)