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- 详细信息
- 文献和实验
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226
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北京鼎国
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箱
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文献和实验取样器将反应物充分混合后,加 20μl 石蜡油覆盖。 3.2 热循环反应 该反应中降温时间非常关键(约1℃/s)。因此,可使用Perkin-Elmer 序列的热循环仪(PCR 仪,如 480,2400 或 9600)。以下所描述的操作均基于Perkin-Elmer Model 480 热循环仪。将反应管放入热循环仪中,按以下程序进行热循环反应: (1)96℃ 1 秒钟 96℃ 30 秒钟 (2)50℃ 1 秒钟 50℃ 1 分钟
轻触凝胶,检查是否成胶。 B-PEG细胞不可降解交联剂交联:混合液会持续液态10分钟之久,才会开始形成凝胶。开始成胶后,混合物就会变得不可抽吸。可利用这段时间将混合液转入合适的无菌培养皿*中,不过在胶凝开始前,需要混合或搅动来重悬细胞,确保细胞会悬浮在凝胶中。完成胶凝约需50分钟孵育时间。加入细胞培养基之前,可用吸头轻触凝胶,检查是否成胶。 * 培养器皿可选择多孔板(6、24、96孔)或任意的无菌培养板或培养瓶。推荐使用未经组织培养处理的聚苯乙烯。如需细胞成像,建议采用带细胞培养腔室的载玻片
水相(离心后,混合物将分离为底层为浅红的、中层为酚-氯仿相、上层为无色的水相。RNA包含在水相中,水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60%)于一新的离心管,按每1 mlTrizol液加0.5 ml异丙醇的比例加入异丙醇,室温(15 ℃~30 ℃)放置10分钟,12000 g(2 ℃~8 ℃)离心10分钟。 4. 弃去上清液(RNA沉淀为一层如凝胶样透明的小块附在管底和管壁),按每1 ml Trizol液加入至少1 ml的比例加入75%乙醇进行洗涤,涡旋
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