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北京鼎国
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文献和实验上清液。 8、加入 Hank’s液 5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。 9、加入培养液 l—2 ml(视细胞量),血球计数板计数。 10、将细胞调整到 5×105/ml左右,转移至 25ml细胞培养瓶中,37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法,在该方法的基础上,可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 (二)组织块直接培养法 自上方法第 3步后,将组织块转移到培养瓶,贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上,将培养液加至瓶中,培养液勿接触组织
过夜。 (3)在PBS(0.1mol/l Ph7.2)中浸5~10min。 (4)浸于0.1mol/L甘氨酸―PBs 液内5min。 (5)为增强组织通透性,将载片置于0.3%Triton X-100(在PBS内)10~15min。 (6)PBS洗3×5min。 (7)在蛋白激酶K(1μg/ml)溶于Tris �HCl (0.1mol/L, pH8.0)和EDTA(50mmol/L,pH8)中37℃20min。也有用蛋白激酶K溶液,不加
观察。 由于上述样品特点的限制,被检物体均放置在培养皿(或培养瓶)中,这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长,能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此,物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来,故称为“倒置显微镜”。 由于工作距离的限制,倒置显微镜物镜的最大放大率为60X。一般研究用倒置显微镜都配置有4X、10X、20X、及40X 相差物镜,因为倒置显微镜多用于无色透明的活体观察。如果用户有特殊需要,也可以选配其它附件,用来完成微分干涉、荧光及简易偏光等观察。 (四)体视显微镜(Stereo
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