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- 文献和实验
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168
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北京鼎国
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箱
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文献和实验: (1)移液枪:200ul、10ul (2)吸头:200ul、20ul (3)EP管1.5ml、100ul (4)水浴箱 2,实验器具的处理与准备 塑料制品:(包括吸头、EP管等) 将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中(必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水)37℃过夜,然后送至高压3次,后在80℃烘烤箱中烘干(或置于37℃中8小时左右烘干),试验前将枪头放入吸头台。 3,试剂配制和准备: (1)DEPC水:泡实验器具的DEPC水的配制:1000ml双蒸水中加1mlDEPC,放在1000ml
溶液配制(一)LB培养基每1000 ml加分析纯NaCl 10 g,蛋白胨10 g,酵母粉5 g,用ddH2O配制,再用10 M NaOH调pH至7.4(100 ml一般加450 μl),高温高压蒸汽灭菌15 min冷却后使用。固体培养基加入琼脂1.5%。10 M(或N)NaOH配制方法是称200 g NaOH加300 ml,搅拌充分溶解后定容至500 ml。(二)溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ溶液Ⅰ:葡萄糖50 mmol/L,EDTA 10 mmol/L,Tris-HCl 25 mmol/L,pH
7.5)、5mmol/L MgCl2 、1%Triton –X 100],轻轻上下振荡至透明,红细胞 完全溶解。 (3)冰浴10min,离心,3000rpm,10min。弃上清,STMT重复处理1~3次。 (4)弃上清,白色沉淀物加10ml STE[0.1mol/L NaCl、10mmol/l Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA(pH8.0)],先少量,充分混匀,然后加10mg/ml蛋白酶K100μl,20%SDS30μl,摇匀,置37℃水浴15~20h。 (5)用等体积饱和
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