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北京鼎国
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文献和实验: (1)移液枪:200ul、10ul (2)吸头:200ul、20ul (3)EP管1.5ml、100ul (4)水浴箱 2,实验器具的处理与准备 塑料制品:(包括吸头、EP管等) 将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中(必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水)37℃过夜,然后送至高压3次,后在80℃烘烤箱中烘干(或置于37℃中8小时左右烘干),试验前将枪头放入吸头台。 3,试剂配制和准备: (1)DEPC水:泡实验器具的DEPC水的配制:1000ml双蒸水中加1mlDEPC,放在1000ml
10% 胎牛血清。细胞培养物均根据 ATCC 的建议使用标准细胞培养方法维持和收获。 球状体形成的初始接种密度取决于细胞类型、球状体形式的生长期持续时间以及分析时球状体所需尺寸等因素。为更好地评估球状体的形成和生长,使用 96 孔球形微孔板在每孔 100 µL 生长培养基中以 40、200、1,000、5,000 和 10,000 个细胞的密度进行接种。通过CellTiter-Glo® 3D细胞活力测定法在 0、24、48 和 72 小时分别对球状体培养物进行分析。上述所有细胞系采用同一接种
7.0),在42℃静置10~15min。偶尔旋转以助混匀。冷却至室温。加100μl经dimethylsuberimidate(DEMS)处理的血细胞(107 /ml)混匀,离心,室温,10min,轻弹试管使沉淀的小块散开,加入1.25ml 2×SSC(pH7.0),42℃,继之,静置于室温10~15min,如前离心,再加1.25ml IBM-Triton X-100,室温静置5min,离心。 注:DEMS处理红细胞方法:经漂洗并离心去除白细胞和血清的红细胞在盐液如PBS中,细胞含量为108 /ml
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