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- 2025年07月16日
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上海古朵生物科技有限公司
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8pmol×20支
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文献和实验倪宏波1 ,3 , 欧阳素贞2 , 王兴龙3 , 鲁会军3 , 雷连成3 (1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 黑龙江密山 158308 ; 2. 安阳大学畜牧兽医系, 河南安阳 455000 ; 3. 解放军军需大学动物科学系, 吉林长春 130062) 摘要: 通过优化反应条件和筛选随机引物,应用100 条随机引物对分离的20 株猪链球菌做随机扩增多态性DNA(RAPD) 分型研究
[注意] 1、电泳时一般RAPD带有5-15条, 大小0.1-2.0kb。 2、 特异性的DNA带可以克隆 作为一个新的分子标记应用。 ISSR 反应体系：10xPCR Buffer 2ul 模板DNA(5Um) 4ul (50ng) 引物(5Um) 2ul (约5pmol) MgCl2 (25Mm) 2.5ul dNTP(1Mm) 2.5ul Taq酶 1单位（U） 0.2ul
min，95℃加热5min 使酶失活,并立即置冰浴冷却； 3. 将逆转录产物稀释3倍，混匀，加入50μmol/L的4种dNTP，上游和下游两种引物各5pmol/L，1×106 cpm 32 P末端标记引物，1U Taq DNA聚合酶，反应总体积为50μl，加50μl石蜡油，共进行25个循环，95℃×30s，95℃～55℃斜坡，2min，55℃30s，55℃～72℃斜坡，30s，72℃×10min。 4. 取PCR产物5～10μl于10% PAGE胶中进行电泳分析,缓冲
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