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硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒
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上海信裕
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硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书 SCD(HY-100234) RIA KIT 硬脂酰辅酶A 去饱和酶(stearoyl-coenzyme Adesaturase, SCD) 是催化饱和脂肪酸(saturated fattyacid, SFA) 第9 位碳链形成n-9 系单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA) 的关键酶。理论上其底物是十二碳到十八碳的饱和脂肪酸,实际在细胞内其底物以棕榈酸(C16:0) 和硬脂酸(C18:0) 为主。分别生成的棕榈油酸和油酸是磷脂和中性脂( 包括甘油三酯和胆固醇酯等) 的重要组成部分。SCD 的调控作用与脂质代谢及胰岛素抵抗密切相关。
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒标本的收集:匀浆液,离心,取上清反应原理:用碳14标记硬脂酸作为底物,加入一系列SCD酶促试剂,经酶作用后得到的产物,通过适当的分离,测定产物的脉冲数即可换算出酶的活力单位。该药盒主要应用范围: 脂代谢方面的研究药盒组成:(常温运输,4℃保存)1. 缓冲液 1瓶2. 酶促试剂 1瓶(含MgCL2,ATP,NADH、BSA、GSH、辅酶A)3. 碳14标记硬脂酸 1瓶(溶于甲苯中)(Amershanm Biosciences)4.闪烁剂 1瓶(含PPO、POPOP、甲苯、TrtionX-100) 5. 终止液 1瓶(含KOH、甲醇)6.硬脂酸油酸溶液 1瓶7.盐酸溶液 1瓶8、三氯化硼甲醇溶液 1瓶9.正己烷溶液(9:1) 1瓶10.硅胶板 1块11.展开剂 1瓶12.2,7二氯荧光素乙醇溶液 1瓶 硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作: SCD RIA加液程序 (单位: ul ) ———————————————————————————— 试 剂 T NSB 样 品 ———————————————————————————— 缓 冲 液 —— 200 100 样 品 —— —— 100 酶促试剂 100 100 100 ———————————————————————————— 摇匀,37度5分钟 ———————————————————————————— 标记物 5 5 5 ———————————————————————————— 混匀,37度10分钟后 ———————————————————————————— 终止液 100 100 100 ———————————————————————————— 硬脂酸油酸 5 5 5 ———————————————————————————— 80度水浴30分钟 ———————————————————————————— 盐酸溶液 100 100 100 ———————————————————————————— 混匀 室温10分钟 ———————————————————————————— 三氯化硼甲醇100 100 100 ———————————————————————————— 80度水浴30分钟 ———————————————————————————— 正己烷 300 300 300 ———————————————————————————— 振荡,离心萃取,取上层,重复两次,并在氮气下吹干 ———————————————————————————— 正己烷 100 100 100 ———————————————————————————— 取10微升上述溶液放在硅胶板点样,进行薄层层析,将薄板上的油酸甲酯的位置上的硅胶粉放到闪烁瓶中,上机,测CPM值。
结果计算:酶活力=饱和脂肪酸的单不饱和脂肪酸的放射活性的量 (每毫克酶蛋白每分钟形成多少纳摩尔的油酸 oil nmol/min/mg protein) 硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒注意事项: 薄板层上硅胶粉油酸甲酯放射性位置的确定:点样1小时以后,用2,7二氯荧光素乙醇液喷,在紫外灯下,油酸甲酯酯位置发出荧光,确定其位置,将此位置上的硅胶粉取出称重,然后放到闪烁瓶中进行测量。(确定位置时应稍大于荧光标识面积,以避免移取过程中损失)xyA012Bo 【中文名称】:牛S100钙结合蛋白(S100)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein (S100) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA413Bo 【中文名称】:牛粘蛋白1(MUC1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Mucin 1 (MUC1) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA021Po 【中文名称】:猪睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA017Bo 【中文名称】:牛上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA017Po 【中文名称】:猪上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA025Bo 【中文名称】:牛嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA025Eq 【中文名称】:马嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA025Gu 【中文名称】:豚鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA025Si 【中文名称】:猴嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA024Bo 【中文名称】:牛内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA028Cp 【中文名称】:羊红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA028Eq 【中文名称】:马红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA028Si 【中文名称】:猴红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA029Bo 【中文名称】:牛E选择素(SELE)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 【灵敏度】:9.375pg/mLxyA029Ca 【中文名称】:狗E选择素(SELE)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 【灵敏度】:9.375pg/mL
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