硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒

硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒 说 明 书
SCD（HY-100234） RIA KIT
硬脂酰辅酶A 去饱和酶(stearoyl-coenzyme Adesaturase, SCD) 是催化饱和脂肪酸(saturated fattyacid, SFA) 第9 位碳链形成n-9 系单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA) 的关键酶。理论上其底物是十二碳到十八碳的饱和脂肪酸，实际在细胞内其底物以棕榈酸(C16:0) 和硬脂酸(C18:0) 为主。分别生成的棕榈油酸和油酸是磷脂和中性脂( 包
括甘油三酯和胆固醇酯等) 的重要组成部分。SCD 的调控作用与脂质代谢及胰岛素抵抗密切相关。

硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒标本的收集：匀浆液，离心，取上清
反应原理：用碳14标记硬脂酸作为底物，加入一系列SCD酶促试剂，经酶作用后得到的产物，通过适当的分离，测定产物的脉冲数即可换算出酶的活力单位。
该药盒主要应用范围：
 脂代谢方面的研究
药盒组成：（常温运输，4℃保存）
1． 缓冲液 1瓶
2． 酶促试剂 1瓶（含MgCL2，ATP，NADH、BSA、GSH、辅酶A）
3． 碳14标记硬脂酸 1瓶（溶于甲苯中）(Amershanm Biosciences)
4．闪烁剂 1瓶（含PPO、POPOP、甲苯、TrtionX-100）
5. 终止液 1瓶（含ＫＯＨ、甲醇）
6．硬脂酸油酸溶液 1瓶
7.盐酸溶液 1瓶
8、三 氯 化 硼甲醇溶液 1瓶
9.正己烷溶液（9:1） 1瓶
10.硅胶板 1块
11.展开剂 1瓶
12.2,7二氯荧光素乙醇溶液 1瓶
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒测定方法：本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作：
SCD RIA加液程序 （单位： ul ）
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试 剂 T NSB 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100
样 品 —— —— 100
酶促试剂 100 100 100
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摇匀，37度5分钟
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标记物 5 5 5
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混匀，37度10分钟后
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终止液 100 100 100
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硬脂酸油酸 5 5 5
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80度水浴30分钟
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盐酸溶液 100 100 100
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混匀 室温10分钟
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三 氯 化 硼甲醇100 100 100
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80度水浴30分钟
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正己烷 300 300 300
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振荡，离心萃取，取上层，重复两次，并在氮气下吹干
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正己烷 100 100 100
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取10微升上述溶液放在硅胶板点样，进行薄层层析，
将薄板上的油酸甲酯的位置上的硅胶粉放到闪烁瓶中，上机，测CPM值。

结果计算：
酶活力=饱和脂肪酸的单不饱和脂肪酸的放射活性的量
（每毫克酶蛋白每分钟形成多少纳摩尔的油酸 oil nmol/min/mg protein）
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒注意事项：
薄板层上硅胶粉油酸甲酯放射性位置的确定：点样1小时以后，用2，7二氯荧光素乙醇液喷，在紫外灯下，油酸甲酯酯位置发出荧光，确定其位置，将此位置上的硅胶粉取出称重，然后放到闪烁瓶中进行测量。（确定位置时应稍大于荧光标识面积，以避免移取过程中损失）
zkA012Bo 【中文名称】：牛S100钙结合蛋白(S100)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein (S100) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA413Bo 【中文名称】：牛粘蛋白1(MUC1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Mucin 1 (MUC1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA021Po 【中文名称】：猪睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA017Bo 【中文名称】：牛上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA017Po 【中文名称】：猪上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA025Bo 【中文名称】：牛嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA025Eq 【中文名称】：马嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA025Gu 【中文名称】：豚鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA025Si 【中文名称】：猴嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA024Bo 【中文名称】：牛内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA028Cp 【中文名称】：羊红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA028Eq 【中文名称】：马红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA028Si 【中文名称】：猴红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA029Bo 【中文名称】：牛E选择素(SELE)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 【灵敏度】：9.375pg/mL
zkA029Ca 【中文名称】：狗E选择素(SELE)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 【灵敏度】：9.375pg/mL