HRP(辣根过氧化物酶RZ=3.2)

HRP 底物分类

底物范围较广，包括二氨基联苯胺 (DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB 是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在 DAB 中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色，且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1. 需要的溶液和特殊设备 DAB，0.05 mol/L Tris 缓冲液 (pH7.6), 0.3％ (W

辣根过氧化物酶（HRP）

HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和氨基糖约占18％，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基，该辅基在403nm波长处有最大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比，也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP制剂，并不意味着酶活性也高

HRP (辣根过氧化物酶) 标记抗体流程

1.         8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml双蒸水溶解，液体呈棕色。 2.         放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室温下继续搅拌40 min，液体呈现草绿色。 3.         将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4 oC 对1  mM pH 4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300 ml，溶液最终呈浅棕色。 4.