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100
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上海远慕生物
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无
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1ml/10ml
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文献和实验一、实验目的1、初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。2、了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。二、实验原理辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白,辛酸为短链脂肪酸,在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质;第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来,操作步骤如图3-10所示。经SDS-PAGE电泳检测能得到电泳纯度较高的Ig。三、仪器、原料和试剂1、仪器磁力搅拌器、离心机、低温冰柜。2、原料抗血清(兔抗鸡血清)。3、试剂(1) 乙酸-乙酸钠缓冲液:60mmol/L,pH
三、 仪器 、原料和试剂 仪器 磁力搅拌器、离心机、低温冰柜。原料抗血清(兔抗鸡血清) 试剂 1. 乙酸—乙酸钠缓冲液:60mmol/L,pH4.0 2. 10×磷酸盐-NaCl 缓冲液(PBS):100mmol/LPBS,pH7.4。称NaCl 80g、Na 2 HPO 4 12H 2 O 29g、KCl 2g 、KH 2 PO 4 2g,加蒸馏水溶解,加入
免疫印记技术(Western-blotting technique)
。其余部分置于封闭液中室温振摇1小时;③取出后置于用封闭液稀释为1:1000的HRP/兔抗鸡IgG-HRP结合物中,室温振摇1小时;④取出膜用洗涤液洗6次、蒸馏水1次、双蒸水1次,每次30秒;⑤最后将膜浸入至底物溶液中直至适中的颜色出现;⑥用蒸馏水、双蒸水冲洗终止反应。 三、结果判定 SO7基因表达产物为26KD,所以在蛋白Marker 显示的26KD处应有一条目的带。但如果所用的抗血清不纯,就有可能在还有其它非特异性条带出现,这可能是菌体
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