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- FUJIFILM Wako
- 日本
- 304-93526
- 2025年07月16日
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- 英文名：
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
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冷藏
用于通过 SDS-PAGE 分离磷酸化蛋白质
Phos-tag® Acrylamide
仅需将Phos-tag® Acrylamide与丙烯-酰胺溶液混合并聚合，即可生成用于分离磷酸化和非磷酸化蛋白质的Phos-tag® SDS-PAGE。
在不使用放射性同位素的情况下，利用 Phos-tag™ SDS-PAGE 即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分离后的凝胶可用于 Western blotting 和质谱分析等后续实验。
Phos-tag™ SDS-PAGE 操作简单，只需在常规 SDS-PAGE 胶中加入 Phos-tag™ Acrylamide 和 Mn2+ 或者 Zn2+ 即可进行实验。在电泳过程中，磷酸化蛋白的磷酸基团与 Phos-tag™ 中的二价金属离子相结合，降低其迁移速度，从而可区分磷酸化与非磷酸化蛋白。
◆优点、特色
● 采用 Phos-tag™ SDS-PAGE 可轻松分离磷酸化蛋白
无任何放射性元素及化学标记！
● 不论氨基酸残基的类型/位点如何，均可使用
可用于未知的磷酸化分析
可用于检测新的磷酸化位点（无需购买商品化磷酸化抗体、无需特意制备磷酸化抗体）
● 磷酸化位点数量/位点不同的磷酸形式也可分离
显示磷酸化程度和磷酸化形式
● 可同时检测磷酸化/非磷酸化形式
可定量各种磷酸化形式
可简单明确有无磷酸化
● 无需RI或特殊的仪器
实验成本低，操作简单。（SDS-PAGE的试剂→只要有设备即可使用）
● 电泳后可用于WB、MS分析，也可用于二维电泳
WB：可分析内源性蛋白
MS：可显示各磷酸化形式的磷酸化位点的组合
二维电泳：可分离相同等电点和分子量的磷酸化形式
适用于内源性蛋白的磷酸化分析！
◆Phos-tag® SDS-PAGE的原理
Phos-tag® Acrylamide的结构
1. 电泳中的磷酸化蛋白会被2个二价金属离子捕获
2. 磷酸化水平越高，电泳速度越慢
3. 根据磷酸化水平进行分离（即使磷酸化位点的数量相同，只要位置不同也可进行分离）
常规的SDS-PAGE（上图：非Phos-tag® 条件下）中，无法确认底物是否被磷酸化。
◆案例、应用
【使用Phos-tag™ SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比较】
“我推荐使用Phos-tag ™ ——东京大学研究院医学研究科 小川觉之”
Phos-tag ™ 是专为研究磷酸化蛋白而新开发出来的试剂。此产品使用方便，不但可用于体外实验，还能定量分析体内蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ™ SDS-PAGE 可用于常规电泳实验，无需购买特殊设备，性价比高。传统蛋白磷酸化的研究需要特异的磷酸化抗体、RI 等其它试剂，操作复杂，花费大，且放射性元素会有安全隐患，而 Phos-tag ™ 的出现恰恰可以弥补这些缺点，为磷酸化蛋白研究提供新的方向。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分离效果图
Lane 1 为非磷酸化蛋白，Lane 2-5 为磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化状态不同而条带迁移率也有所不同。
磷酸化/ 非磷酸化蛋白的数量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的丰度等都可根据条带迁移和条带浓度求得。
【资料提供】
日本东京大学研究生院医学系研究科
【二维电泳中的应用：分析 hnRNP K 磷酸化异构体】
小鼠巨噬细胞 J774.1 经 LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到 hnRNP K 。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是 Phos-tag ™ SDS-PAGE，可分离 hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
二维电泳
同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化学研究所 RCAI 小原收
【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的变化】
常规 SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印迹实验分析 EGF 刺激的 A431 细胞中 MAPK 磷酸化水平。
摘自 Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.
【使用示例：α-酪蛋白去磷酸化反应随时间的变化】
使用Phos-tag® SDS-PAGE和常规SDS-PAGE分离碱性磷酸酶随时间（孵育时间：0~120 min）去磷酸化的α-酪蛋白样品。
◆相关产品
|
产品名称 |
用 途 |
|
Phos-tag™ Acrylamide |
分离: SDS - PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白 |
|
SuperSep Phos-tag™ |
分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide |
|
Phos-tag™ Biotin |
检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体 |
|
Phos-tag™ Agarose |
纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白 |
|
Phos-tag™ Mass Analytical Kit |
分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度 |
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发，对应指导手册请见【技术资料】。
◆产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 304-93526 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯-酰胺5mM水溶液 | 0.3 mL | 蛋白研究 | 溶液型 |
| 300-93523 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯-酰胺 | 2 mg | 蛋白研究 | 粉末型 |
| 304-93521 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯-酰胺 | 10 mg | 蛋白研究 | 粉末型 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 301-93531 | Phos-tag™ Biotin BTL-104 Phos-tag™ 生物素 | 10 mg | - |
| 308-97201 | Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution Phos-tag™ 生物素1 mM水溶液 | 0.1 mL | - |
| 387-07321 | Phos-tag™ Tip Phos-tag™ 琼脂糖枪头 | 8 pcs | - |
| 192-17401 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%, 13 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，6%，13孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 199-17391 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%, 17 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，6%，17孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 193-16691 | SuperSepTM Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，15%，13孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 193-16711 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，10%，13孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 196-16701 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，15%，17孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 190-16721 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，10%，17孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 195-17371 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 13 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，7.5%，13孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 192-17381 | SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L，7.5%，17孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 193-16571 | SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/ L，12.5%，17孔（用于Wako EasySeparator电泳仪） | 5 块 | 电泳用 |
| 195-16391 | SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag™ 预制胶50 μmol/L ，12.5%，13孔 | 5 块 | 电泳用 |
| 305-93551 | Phos-tag™ Mass Analytical Kit Phos-tag™ 质谱分析试剂盒 | 1 Set | 电泳用 |
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文献和实验- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-polyac1ylarnide gelelectrophoresis, SDS-PAGE)、Native-PAGE 等，比较常用的是前者。SDS-PAGE 中的蛋白需先变性展开再进行研究，主要是根据蛋白的质量在凝胶中进行分离，特别适用于评估蛋白质量的变化。与之相反的便是 Native-PAGE：其实验原理是蛋白质保留其原生的折叠状态，并根据其净电荷、质量、形状在凝胶中分离，如体积小、结构紧凑的蛋白会迁移更快，可用于评估蛋白的化学修饰。嗦，接下来我主要 bia 下常用
= 0.6。加入IPTG至终浓度为1 mM，在200转/分钟的振荡器中将培养物在32℃培养5小时之后，通过以4000g离心15分钟收获细胞。为了鉴定融合蛋白在细胞中的表达，首先，在IPTG诱导之前和之后收集一部分细胞，以4000g离心15分钟，然后用PBS重悬沉淀并在冰上超声处理，收集上清液。分别和沉淀，并通过SDS-PAGE凝胶分析。接种大肠杆菌 BL21用于蛋白质表达IPTG诱导的融合蛋白的SDS-PAGE分析。通过SDS-PAGE分离蛋白质并用考马斯亮蓝染色。泳道1：蛋白质分子量标记; 泳道2：未诱导
沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。 二、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的分离、纯化 1. NTA层析柱的准备：在层析柱中加入1mL NTA介质，并分别用8mL 去离子水，8mL上样缓冲液洗涤。 2. 重组蛋白的变性裂解：在冰浴中冻融菌体沉淀，加入5mL上样缓冲液, 用吸管抽吸重悬，超声波破裂菌体，用振荡器等轻柔的混匀样品60min, 4℃ 12000rpm 离心 30 min, 将上清吸至一个干净的容器中，并弃沉淀。取10ul 上清样品用于SDS-PAGE 分析。 3. 上清样品以10
