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- 304-93526、300-93523、304-93521
- 2025年12月16日
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- 技术资料
- 英文名：
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
- 保存条件：
2-10℃
- 规格：
2mg(300-93523)/10mg(304-93521)
| 规格： | 2mg(300-93523) | 产品价格： | 询价 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 10mg(304-93521) | 产品价格： | 询价 |
Phos-tag™ Acrylamide
SDS-PAGE分离不同磷酸化水平的蛋白！
在不使用放射性同位素的情况下，利用Phos-tag™ SDS-PAGE即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分离后的凝胶可用于Western blotting和质谱分析等后续实验。
Phos-tag™ SDS-PAGE操作简单，只需在常规SDS-PAGE胶中加入Phos-tag™ Acrylamide 和Mn2+或者Zn2+即可进行实验。在电泳过程中，磷酸化蛋白的磷酸基团与Phos-tag™中的二价金属离子相结合，降低其迁移速度，从而可区分磷酸化与非磷酸化蛋白。
◆原理
◆优点、特色
● 采用Phos-tag™ SDS-PAGE可轻松分离磷酸化蛋白
无任何放射性元素及化学标记！
● 可检测不同磷酸化水平的磷酸化蛋白
无需任何磷酸化抗体！
● 适用于内源性蛋白的磷酸化分析！
◆案例、应用
【使用Phos-tag™ SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比较】
我推荐使用Phos-tag ™ ——东京大学研究院医学研究科 小川觉之
Phos-tag ™ 是专为研究磷酸化蛋白而新开发出来的试剂。此产品使用方便，不但可用于体外实验，还能定量分析体内蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ™ SDS-PAGE 可用于常规电泳实验，无需购买特殊设备，性价比高。传统蛋白磷酸化的研究需要特异的磷酸化抗体、RI 等其它试剂，操作复杂，花费大，且放射性元素会有安全隐患，而Phos-tag ™ 的出现恰恰可以弥补这些缺点，为磷酸化蛋白研究提供新的方向。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分离效果图
Lane 1 为非磷酸化蛋白，Lane 2-5 为磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化状态不同而条带迁移率也有所不同。
磷酸化/ 非磷酸化蛋白的数量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的丰度等都可根据条带迁移和条带浓度求得。
【资料提供】
日本东京大学研究生院医学系研究科
【二维电泳中的应用：分析hnRNP K 磷酸化异构体】
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ™ SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
二维电泳
同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化学研究所RCAI 小原收
【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的变化】
常规SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印迹实验分析EGF 刺激的A431 细胞中MAPK 磷酸化水平。
摘自Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 304-93526 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙.烯酰胺5mM水溶液 |
0.3mL | 蛋白研究 |
| 300-93523 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙.烯酰胺 |
2mg | 蛋白研究 |
| 304-93521 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙.烯酰胺 |
10mg | 蛋白研究 |
| 134-15302 | Manganese(II) Chloride Tetrahydrate氯化锰四水合物 | 25g | for Molecular Biology |
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文献和实验膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDS-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 方法
凝胶电泳可有效分离膜镶嵌蛋白质。 下面要介绍的方法是以离子交换层析替代 2D-GE 电泳中 IEF，如果样品量充足，还可以辅以凝胶过滤色谱层析 [7] 。最终用 SDS-PAGE 电泳进一步分离膜镶嵌蛋白质。经过上述这些分离过程，许多膜镶嵌蛋白的胶内酶解和 MALDI-TOF/MS 分析获得了成功。 这个方法的目标之一是在一个单一的实验构架内，分离膜组分中不同类别的蛋白质，包括大部分的疏水、酸性和碱性蛋白。它们可通过染色胶和 MALDI-TOF/MS 蛋白质指纹谱进行蛋白质分析。本章节介绍
一. 实验原理SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。二. 试剂和器材试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）：0.6ml 1mol/L的Tris-HCl（pH
分离成数个区带。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS），则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS-PAGE测定蛋白质分子量。 三、试剂与器材 试剂：10%SDS、凝胶贮液（30%ACr-0.8%Bis）、分离胶缓冲液（3.0mol
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