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- 2025年10月05日
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TMB 经HRP 作用后，约40 分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2 小时后即可完全消退至无色。TMB 的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24 小时)不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读ELISA 结果吸光度的光度计。脑源性神经营养因子检测试剂盒酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到0.001，准确性为±1%，重复性达0.5%。酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15 -30℃ ，使用前先预热仪器 15-30 分钟，测读结果更稳定。
测读 A 值时，要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm 波长。有的酶标仪可用双波长式测读，即每孔先后测读两次，第一次在最适波长(W1)，第二次在不敏感波长(W2)，两次测定间不 移动ELISA 板的位置，最终测得的A 值为两者之差(W1-W2)。双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
肉眼判断结果时，显色浅不易观察，影响结果的准确性，必须使用酶标仪检测，以保结果一致性。
脑源性神经营养因子检测试剂盒5.HooK效应影响
随着ELISA一步法的应用，一些标本中抗原含量过高，产生HooK效应。影响检测结果，采用同步稀释测定或使用线性范围高的两对半定量法可以减HooK反应的发生。
脑源性神经营养因子检测试剂盒6.干扰物质的影响
有人认为大约 40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果;常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。如RF因子可与标记二抗的FC段法结合造成假阳性，补体从C1q活化，使一抗和酶标二抗的抗体分子发生变构，Fc的C1q分子结合点暴露出来，则补体C1q可将二者连接起来造成假阳性，采用56℃30分钟灭活补体可降低假阳性率，高浓度的AFP(如孕妇)，在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深影响检测结果。
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文献和实验一、反应曲线 首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示： 二、反应原理 对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
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