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- 2025年07月14日
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100
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上海古朵生物有限公司
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10ml
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文献和实验1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
) 克隆困难怎么办？ 对于大片段载体构建实验而言，难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点，从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略，具体方案如下： ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略，降低连接难度； ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增，所以需要从源头保证实验成功率，即保证模板完整度，在扩增前确保模板未发生降解；其次优化 PCR 体系，比如选择长片段专用 PCR 酶，通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等； ③避免高拷贝载体（如 pUC
summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换 zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid? zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
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