Human IL-2 Valukine ELISA Kit

Human IL-2 Valukine ELISA Kit

人 IL-2 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL110
适用于定量检测天然和重组人白介素 2（IL-2）的含量
科研专用，不可用于临床诊断

背景
人白细胞介素2（IL-2），又称为T细胞生长因子（TCGF），是一个15-18 kDa大小
的具有不同糖基化的α-螺旋多肽，属于常见的γ链（γc）细胞因子家族成员（1-4）。它
以单体存在，半衰期很短（<30分钟）（1）。人IL-2的前体有153个氨基酸，其中包含
一个20个氨基酸的信号序列，和一个133个氨基酸的成熟多肽（5, 6）。IL-2成熟蛋白包
含一个在3位苏氨酸可O型糖基化的位点和三个半胱氨酸，其中的两个半胱氨酸所形成
的链内二硫键是IL-2活性所必不可少的（7）。成熟的人IL-2氨基酸序列与犬、大鼠、猫
和猕猴的IL-2同源性分别为73%、66%、78%和97%。虽然人IL-2与高度多态的小鼠IL-2
仅有60%的氨基酸同源性，但人IL-2对小鼠细胞也具有生物活性。据报道分泌IL-2的细
胞包括γδ T细胞（8）、活化的常规CD4+和CD8+T细胞（1, 9）、神经元（10, 11）、
小胶质细胞（12）、造血干细胞（13）。
IL-2受体（IL-2R）由三个亚基构成，即一个55 kDa的CD25/IL-2Rα链、一个70 kDa
的CD122/IL-2Rβ链，以及一个65 kDa的CD132/γc链（1, 3）。IL-2先与CD25结合，形
成的二亚基复合物再招募CD122和CD132，形成具有四个亚基的信号复合物（1, 14）。
除了能与IL-2形成复合物，CD122/IL-2Rβ也可同IL-15形成四亚基信号复合物。CD132/c
亦可成为IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21信号的受体（1, 3）。
体外研究表明，IL-2在T细胞活化和扩增中起重要作用。在体内，IL-2是调节性T细
胞（Treg）发育、维持和功能的关键，而调节性T细胞可为自身免疫性疾病提供保护。
此外，IL-2也可通过调节T细胞贩运基因的表达和Th2型细胞因子的产生，从而促进其靶
器官自身免疫性炎症。在CD8+T细胞亚群中，IL-2是获得最佳一级反应和分化到终端效
应细胞的必要关键。IL-2也促进了CD8+T细胞的发育和激活成为记忆细胞（1）。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-2单抗包被于微孔板上，样品和标准品中的IL-2
会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记的抗人IL-2多
抗，与结合在微孔板上的IL-2结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去；加入TMB底
物溶液，溶液颜色逐渐变成蓝色，加入终止液溶液变黄并且停止变化。用酶标仪测定吸
光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释剂（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测20次，以确定板间精确度。
细胞培养上清/血清
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 162 435 809 170 470 897
标准差 6.4 17.3 28.5 11.7 28.4 49.0
CV% 3.9 4.0 3.5 6.9 6.0 5.5
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人IL-2，测定其回收率。回收率范围在
98-110%，平均回收率在106%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人IL-2，测定其回收率。回收率范围在
77.1-95.0%，平均回收率在81.7%。

C. 灵敏度
人IL-2的最低可测剂量（MDD）一般小于15.6 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 标定
此ELISA试剂盒是针对R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人IL-2进行校准
的。NIBSC/WHO IL-2第2国际标准品(86/500)作为效价标准，在本试剂盒中进行了评估。
NIBSC/WHO标准品是大肠杆菌来源的重组人IL-2。
国际标准品(86/500)的剂量反应曲线与Valukine标准曲线平行。若要将使用Valukine
Human IL-2 kit获得的样本值转换为NIBSC 86/500的近似单位，请使用以下公式：
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NIBSC (86/500) approximate value (IU/mL) = 0.022 × Valukine Human IL-2 value
(pg/mL)

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人IL-2蛋白。将以下因子用稀释剂（1×）配制成100ng/mL
的浓度来检测与人IL-2的交叉反应。将100ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组人
IL-2对照品中，来检测对人IL-2的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。
重组人蛋白 重组小鼠蛋白
IL-2 sRα IL-2
IL-2 Rβ IL-4
IL-2 Rγ
IL-4