- ￥3300
- Novus
- 78.1-5000
- VAL147
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 样本：
Cell culture supernatant, serum
- 适应物种：
h
- 应用：
VAL147
- 检测范围：
78.1-5000
- 规格：
96T
Human Klotho Valukine ELISA Kit
适用于定量检测天然和重组人 Klotho 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断
I. 背景
Klotho也叫Klotho-alpha，是糖苷酶-1超家族中Klotho家族的创始成员(1, 2)。Klotho
在与钙调节有关的区域表达，主要在肾远端曲小管，也在脑脉络丛(产生脑脊液)和甲状
旁腺中表达(1)。它是1012个氨基酸(aa)的I型跨膜蛋白，包含一个32 aa的信号序列，一
个948 aa的胞外结构域 (ECD)，ECD包括两个胞外糖苷酶样结构域，一个21 aa的跨膜
域和一个11 aa的胞内域。在ECD区域内，人Klotho与小鼠、大鼠、牛和马分别具有87%、
90%、90%和86%的氨基酸同源性。虽然有一个截短形式的549 aa被预测为可溶性70
kDa亚型，但在血浆和脑脊液中发现的形式是由135 kDa糖基化的全长Klotho蛋白水解
断裂而产生的130 kDa亚型(3, 4)。Klotho在细胞内主要以120 kDa的亚型存在于内质网
和高尔基体膜上(4)。
Klotho缺陷小鼠的表型类似于早衰，包括动脉硬化、骨质疏松、皮肤萎缩、不孕不
育、肺气肿和早亡(2)。相反，过量的Klotho可延长寿命(5)。Klotho是FGF23与FGF R1
相互作用的辅助因子(6)。这种相互作用负调控1α -羟化酶，这是合成维生素D (1,25
(OH)2D3)的限速酶(7)。Klotho缺陷小鼠由于维生素D过量而出现严重高磷血症和软组织
异位钙化(2, 7)。Klotho和Klotho-beta都是FGF19结合的辅助因子(8)。Klotho还显示了
葡萄糖苷酸酶的活性，它可以激活肾脏离子通道TRPV5来重新吸收尿钙(9)。也有报道
称Klotho可以下调脂肪细胞中的胰岛素或IGF-1信号，结合和拮抗Wnt分子，促进甲状旁
腺激素的释放(10-12)。
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人Klotho抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的人Klotho会与固定在板上的抗体结合，接着加入生物素化的抗人Klotho检测抗体进
行 孵 育 ， 洗 涤 去 除 未 结 合 的 物 质 后 ， 加 入 链 霉 亲 和 素 标 记 的 辣 根 过 氧 化 物 酶
（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
仅供科研使用，不可用于体外诊断；
该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
请在试剂盒有效期内使用；
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等
III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 207.5 625.5 2266.9 199.4 609.3 2214.8
标准差 6.7 10.4 62.3 11.0 20.1 77.0
CV% 3.2 1.7 2.7 5.5 3.3 3.5
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人Klotho，测定其回收率。回收率范围
在117.3-122.4%，平均回收率在120.3%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人Klotho，测定其回收率。回收率范围在
90.3-111.4%，平均回收率在100.0%。
C. 灵敏度
人Klotho的最低可测剂量（MDD）一般小于5.2 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人Klotho蛋白所
校正。
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文献和实验有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法：1， TORCH及传染病试剂盒（间接法），见2.2.32， TORCH-IgM捕获法特色：包被抗体，标记抗原原理：3， 细胞因子试剂盒采用的方法路线（ABC-ELISA）原理产品特色：采用ABC法，灵敏度更高，特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的，使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
的原理用于分子诊断方面：TrimGen公司的KRAS Mutation Detection Kit在96孔板里一次能实现7/8个KRAS突变位点的检测。 另外基于相同原理的技术还有PPT-ELISA。这是用来筛截短突变的，相关文章见：1，Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISA . 2，An ELISA-based high throughput protein truncation test
时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。2、样本需要量小。仅需要50μL溶液就可进行一次检测。3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量，排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。5、检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式比较固定
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