免洗Fluo-8钙检测试剂盒

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

产品优势  

均相检测设计，免洗步骤，简化操作流程

简要概述

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒，Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙检测试剂盒基于均相荧光检测原理，可精准监测细胞内钙离子动态变化，为GPCR研究提供高效解决方案。Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙检测试剂盒采用专利Fluo-8 免洗荧光探针，该探针具有以下显著优势：首先，作为目前高通量筛选（HTS）中最灵敏的钙离子指示剂，Fluo-8 NW能自由穿透细胞膜；其次，进入细胞后，其疏水性保护基团会被非特异性酯酶水解，转化为带负电荷的活性形式并滞留胞内；最重要的是，当与钙离子结合时，其荧光强度可显著增强100-250倍。在实验过程中，当表达特定GPCR的细胞受到化合物刺激时，受体激活会引发细胞内钙离子释放，此时Fluo-8 NW探针能即时捕获这一信号变化，产生显著的荧光增强效应。得益于长波长检测、超高灵敏度等特性，Fluo-8 NW成为细胞钙信号检测的理想工具。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化，大幅提升药物筛选效率。百萤生物是AAT Bioquest  的代理商，为您提供理想的钙检测试剂盒。

百萤生物公司简介
                                                                       
西安百萤生物科技有限公司是一家专注从事生物、化学试剂及其试剂盒的高新技术企业；主要以荧光探针，分子探针，核酸/蛋白质标记、细胞检测等技术和产品为研发核心，产品广泛应用于基因合成、细胞检测、活体示踪，抗体标记、新药筛选等领域

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其它非科研用途！

 

产品说明书

样品分析方案

概述

用含有0.5-1％FBS的Fluo-8 NW染料加载溶液

在生长培养基中制备细胞（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在室温下孵育1小时

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于粘附细胞：在生长培养基中将细胞过夜，对于96孔板，具有0.5-1％FBS，40,000至80,000个细胞/孔/100μL，或者对于384孔板，为10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和Fluo-8 NW染料加载溶液中（参见下面的步骤2.4），125,000至250,000细胞/孔/100μL 用于96孔poly-D赖氨酸平板或30,000至60,000细胞/孔/25μL用于384孔聚-D赖氨酸平板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。

 

2.准备Fluo-8 NW染料加载溶液：
2.1在使用前，在室温下1小瓶Fluo-8 NW（组分A），1瓶10XPluronic®F127Plus（组分B）和HHBS（组分C）。

2.2Make Fluo-8 NW储备溶液::加入20μL（Cat＃36314）或200μL（Cat＃36315和＃36316）DMSO到Fluo-8 NW（A组分）小瓶中，混匀。
注意：20μLFluo-8 NW原液足以用于一个平板。如果管子密封，未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并在<-20摄氏度下储存超过一个月。避光，避免反复冻融循环。

2.3制备1X测定缓冲液：
一个）。对于Cat＃36314（1个试剂盒）和＃36315（10个试剂盒试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中制备1X测定缓冲液，并充分混合。

B）。对于Cat＃36316（100个试剂盒试剂盒），将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中，制成1X试剂缓冲液，并充分混合。
注意：对于一个平板，10 mL的1X测定缓冲液就足够了。在<-20℃下等分并储存未使用的1X测定缓冲液。避光，避免反复冻融循环。

2.4为一个细胞板制备Fluo-8 NW染料加载溶液：将20μLFluo-8 NW储备溶液（来自步骤2.2）加入10 mL 1X分析缓冲液（来自步骤2.3），并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

3.运行钙测定：
3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8 NW染料加载溶液（来自步骤2.4）加入到细胞板中。
注意：或者，在含有5-10％FBS的生长培养基中培养细胞以改善细胞生长。在这种情况下，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基以最小化背景荧光和化合物干扰血清。 [我们为那些喜欢保持培养基去除步骤的人提供2个独立的中等去除钙测定试剂盒（Cat＃36308和36309）]。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1：如果测定需要37℃，立即进行实验，无需进一步室温孵育。
注2：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1-2小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.3用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。
注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使信号测试强度在7,000到10,000左右。