Amplite 比色法B酮酸检测试剂盒

简要概述

Amplite 比色法丙.酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙.酮酸的试剂盒，丙.酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙.酮酸分子，通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时（有氧呼吸），丙.酮酸被丙.酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA，丙.酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为三羧酸循环）产生ATP。当氧气不足时，丙.酮酸盐会厌氧分解，在动物体内产生乳酸盐，在植物和微生物体内产生乙醇。丙.酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙.酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关，并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 荧光丙.酮酸盐检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法，用于量化生物样品中的丙.酮酸盐。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可以在Ex / Em = 540 / 590nm处通过荧光酶标仪中的丙.酮酸盐传感器检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法丙.酮酸检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备样品以及连续稀释的丙.酮酸标准溶液（50 µL）
2.加入等体积的工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm处的吸光度

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Quest Fluor 丙.酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙.酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙.酮酸传感器储备溶液。

 

2.标准溶液

丙.酮酸标准
将2μL100 mM丙.酮酸盐（组分D）添加到998μLPBS（pH 7.0）中，得到200μM丙.酮酸盐标准溶液（PS7）。 然后执行1：2的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的丙.酮酸标准品（PS6-PS1）。

 

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。 将整个小瓶的Enzyme Mix2（100μL）和25 uL的200X丙.酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意：立即使用，避免直接暴露在光线下。

 

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中丙.酮酸标准溶液和测试样品的布局。 PS =丙.酮酸标准溶液（PS1- PS7，3.125至200 µM），BL =空白对照（PBS），TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
PS1	PS1	...	...
PS2	PS2	...	...
PS3	PS3
PS4	PS4
PS5	PS5
PS6	PS6
PS7	PS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
PS1-PS7	50ul	连续稀释液（3.125至200 µM）
BL	50ul	PBS
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备丙.酮酸标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在丙.酮酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL工作溶液，使丙.酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下进行丙.酮酸测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。