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Amplite 比色法B酮酸检
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Amplite® Colorimetric Pyruvate Assay Kit
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西安百萤生物科技有限公司
Amplite 比色法丙.酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙.酮酸的试剂盒,丙.酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙.酮酸分子,通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时(有氧呼吸),丙.酮酸被丙.酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA,丙.酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环(也称为三羧酸循环)产生ATP。当氧气不足时,丙.酮酸盐会厌氧分解,在动物体内产生乳酸盐,在植物和微生物体内产生乙醇。丙.酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙.酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关,并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 荧光丙.酮酸盐检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法,用于量化生物样品中的丙.酮酸盐。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应,可以在Ex / Em = 540 / 590nm处通过荧光酶标仪中的丙.酮酸盐传感器检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法丙.酮酸检测试剂盒。
样品实验方案
简要概述
1.准备样品以及连续稀释的丙.酮酸标准溶液(50 µL)2.加入等体积的工作溶液(50 µL)3.在室温下孵育30分钟至1小时4.监测575 nm处的吸光度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。1. Quest Fluor 丙.酮酸传感器储备溶液(200X):将55 µL DMSO(组分E)添加到Quest Fluor 丙.酮酸传感器(组分A)中,制成200X Quest Fluor 丙.酮酸传感器储备溶液。
2.标准溶液
丙.酮酸标准将2μL100 mM丙.酮酸盐(组分D)添加到998μLPBS(pH 7.0)中,得到200μM丙.酮酸盐标准溶液(PS7)。 然后执行1:2的系列稀释,以得到剩余的系列稀释的丙.酮酸标准品(PS6-PS1)。
3.工作溶液
将5 mL测定缓冲液(组分C)添加到一个Enzyme Mix1瓶(组分B1)中,并充分混合。 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶(组分B2)中并充分混合。 将整个小瓶的Enzyme Mix2(100μL)和25 uL的200X丙.酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意:立即使用,避免直接暴露在光线下。
样品操作及实验分析
表1.白色透明96孔微孔板中丙.酮酸标准溶液和测试样品的布局。 PS =丙.酮酸标准溶液(PS1- PS7,3.125至200 µM),BL =空白对照(PBS),TS =测试样品。
表2.每个孔的试剂组成
1.根据表1和2中提供的布局,准备丙.酮酸标准品(PS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂,而不是50 µL。
2.在丙.酮酸标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL工作溶液,使丙.酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。 注意:在pH 6.5至7.0下进行丙.酮酸测定。
3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。
4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。
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