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- AAT Bioquest
- 美国
- 12530
- 2026年02月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
在零下15度以下保存, 避免光照
- 保质期：
2年
- 英文名：
Amplite® Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow*
- 库存：
3
- 供应商：
AAT Bioquest
Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒
| 货号 | 12530 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 1 plate | ||
| Ex (nm) | 429 | Em (nm) | 466 |
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因的试剂盒，β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因，而这其中，萤火虫荧光素酶是功能最多的报告基因。最近，其它荧光素酶的使用在逐渐稳固的上升，例如来源于海洋桡脚类的动物高斯基质衍而来的生物发光酶，即高斯荧光素酶。由于高斯荧光素酶受体分子非常小，因此不需要ATP的辅助。高斯荧光素酶是一种分子量为20kDa的蛋白质，在氧分子存在条件下，催化腔肠素氧化形成荧光。Amplite 高斯荧光素酶报告基团检测试剂盒使用独特的发光基质对细胞培养基中荧光素酶活性进行定量检测。我们所提供的发光产品与高斯荧光素酶反应时，发射强光。本试剂盒提供所有必需组分，并且适用于HTS（高通量筛选）研究。本试剂盒灵敏度高，可以便捷地用于96或384微孔板分析。本检测法适合标准的细胞生长培养基。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备样品（50 µL）
2.加入50 µL高斯荧光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-15分钟
4.监控发光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1高斯荧光素酶原液（100X）：
将50 µL（对于Cat＃12530），0.5 mL（对于Cat＃12531）或2.5 mL（对于Cat＃12532）反应缓冲液（组分B）转移到1小瓶荧光素酶底物（组分A）中，并充分混合。
2.工作溶液
使用1：100稀释因子和测定缓冲液（组分C）稀释100X高斯萤光素荧光素酶测定储备液，以制备高斯萤光素荧光素酶工作溶液。 注意：重新配制的高斯荧光素酶工作溶液对光非常敏感。 它不稳定，应准备新鲜，放在冰上，并在2小时内使用。
样品操作及分析
1.通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在37°C，5％CO2培养箱中孵育所需的时间，通常为4小时至过夜。
3.运行高斯荧光素酶测定：将连续稀释的高斯荧光素酶或培养上清液的50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板移液到微量滴定板中，然后与50 µL /孔/ 96-孔混合。 孔板或高斯荧光素酶工作溶液的12.5 µL /孔/ 384孔板。
4.在避光的条件下，在室温下孵育平板10至15分钟。
5.用发光计读取发光强度。
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文献和实验A multifunctional, synthetic Gaussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections
Authors: Enjalbert B, Rachini A, Vediyappan G, Pietrella D, Spaccapelo R, Vecchiarelli A, Brown AJ, d'Enfert C.
Journal: Infect Immun (2009): 4847
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Authors: Patel KG, Ng PP, Kuo CC, Levy S, Levy R, Swartz JR.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (2009): 971
Gaussia luciferase reporter assay for monitoring biological processes in culture and in vivo
Authors: Tannous BA.
Journal: Nat Protoc (2009): 582
Gaussia luciferase variant for high-throughput functional screening applications
Authors: Maguire CA, Deliolanis NC, Pike L, Niers JM, Tjon-Kon-Fat LA, Sena-Esteves M, Tannous BA.
Journal: Anal Chem (2009): 7102
Secreted Gaussia luciferase as a biomarker for monitoring tumor progression and treatment response of systemic metastases
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Sensitive in vivo imaging of T cells using a membrane-bound Gaussia princeps luciferase
Authors: Santos EB, Yeh R, Lee J, Nikhamin Y, Punzalan B, La Perle K, Larson SM, Sadelain M, Brentjens RJ.
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在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统，结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速，灵敏，简便。系统还提供PLB裂解液，用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞，不需操作单个样品
zhqmjeremy 各位战友好。有一个问题，未得其解，恳请帮助。 做荧光素酶报告基因的时候，检测的是细胞因子的启动子。换句话说，是细胞因子的启动子融合的报告基因被转染到细胞内，通过刺进因素作用后，检测启动子的表达情况。这个是背景。 问题是，怎么通过使用内参的方法，去除转染效率不同的孔和细胞之间的差别。 因为，个人认为，细胞数对报告基因的表达量影响比较大。 谢谢。 daidaiyidaidai
【求助】用于检测双荧光素酶报告基因的细胞究竟是应该同时转染两种质粒呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因？谢谢
lsdcfhyj 向大家请教关于双荧光素酶报告基因检测系统与单荧光素酶报告基因检测系统的问题，两者的区别我基本清楚了，只是我没弄清楚用于检测的细胞究竟是应该同时转染两种质粒（分别含虫荧光素酶报告基因和海肾荧光素酶报告基因）呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因？还有一个问题是如果是要转染两种质粒的话，是只需在含虫荧光素酶基因质粒中插入所要检测的调控元件基因，还是两种质粒中的荧光素酶基因前都要插入调控元件？谢谢 msniu
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