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- AAT Bioquest
- 美国
- 21008
- 2025年12月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-15℃避光防潮
- 保质期：
12个月
- 英文名：
EGTA tetrasodium salt
- 库存：
1
- 供应商：
西安百萤
- CAS号：
13368-13-3
钙离子指示剂EGTA，四钠盐*10mM水溶液*
| 货号 | 21008 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 10 mL | ||
| Ex (nm) | Em (nm) | ||
| 分子量 | 468.28 | 溶剂 | Water |
简要概述
钙离子指示剂EGTA，四钠盐*10mM水溶液*是AAT Bioquest生产的钙离子指示剂，EGTA是水溶性和细胞不可渗透的钙螯合剂。它对钙的选择性很高。与EDTA相比，EGTA对镁的亲和力较低，因此对钙离子具有更高的选择性。它在缓冲溶液中很有用，类似于活细胞中的环境，其中钙离子通常比镁浓度低至少一千倍。通过四价EGTA结合钙离子的pKa是11.00，但质子化形式对结合没有显着贡献，因此在pH 7时，表观pKa变为6.91。百萤生物提供优质的钙离子指示剂EGTA，四钠盐*10mM水溶液*。
产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
带有钙指示剂AM酯：
AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。
b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。
c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。
e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。
注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。
f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。
g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。
注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图象处理，对生物样品进行定性、定量、定时和定位研究。已广泛应用于细胞生物学、生理学 、病理学、解剖学、胚胎学、免疫学和神经生物学等领域。 一. 组成 倒置或直立荧光显微镜 、扫描头(照明针孔、探测针孔、荧光滤片系统、镜扫描系统和光电倍增管)、扫描头控制电路、计算机和图像输出设备 二. 原理 Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点
作用。在哺乳动物的神经系统中，钙离子是一类重要的神经元胞内信号分子，神经元静息状态下，胞内钙离子浓度约为50-100nM，而当神经元活动的时候，胞内钙离子浓度能上升10-100倍，而钙离子对于突触囊泡释放必不可少；神经元在放电的时候会爆发出一个短暂的钙离子浓度高峰，这意味着神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动。神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动示意图因而，神经元钙离子成像技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系，利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针（钙离子指示
3次，最后用无钙缓冲液稀释。2、随机测定每管细胞悬液样品（以下简称样品）的单个细胞的荧光强度，记为F值。3、加入10%Triton X 100，（破膜用）；加入1mmol/L氯化钙，吹打均匀，孵育1~10min，测定荧光即Fmax值。4、加入EDTA，20μl（钙螯合剂），孵育1~10min，激发波长488nm测定荧光，即Fmin值。加0.1％triton是增加膜通透性，使细胞外Ca2＋进入细胞内，作为最大值。加EGTA是为了螯合Ca2＋，作为最小值生理环境中细胞内钙离子浓度远低于细胞外液（大约
