胞内钙荧光探针EGTA,四钠盐 *10mM水溶液*

钙离子指示剂EGTA，四钠盐*10mM水溶液*

简要概述

钙离子指示剂EGTA，四钠盐*10mM水溶液*是AAT Bioquest生产的钙离子指示剂，EGTA是水溶性和细胞不可渗透的钙螯合剂。它对钙的选择性很高。与EDTA相比，EGTA对镁的亲和力较低，因此对钙离子具有更高的选择性。它在缓冲溶液中很有用，类似于活细胞中的环境，其中钙离子通常比镁浓度低至少一千倍。通过四价EGTA结合钙离子的pKa是11.00，但质子化形式对结合没有显着贡献，因此在pH 7时，表观pKa变为6.91。百萤生物提供优质的钙离子指示剂EGTA，四钠盐*10mM水溶液*。

产品说明书

钙指示剂AM Esters的使用

带有钙指示剂AM酯：

AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！