Takara RR047A

为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于SYBR^® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR^® Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)、Premix Ex Taq (Probe qPCR) 等定量试剂组合使用。
注意：Takara Bio使用SYBR^® Green I 作为研究试剂已得到Molecular Probes Inc.的许可。SYBR^®为 Molecular Probes Inc.的注册商标。

1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser，只需2 min即可除去基因组DNA。
2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA，是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的最佳试剂。
3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix，可以均匀合成样品中的各种cDNA。
4. 本制品提供了SYBR Green^®分析法和TaqMan^®探针分析法各自最适反应体系，可以根据分析方法选择体系。
(1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。 
(2) 反转录反应中总RNA的用量。

1. 当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然后再