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- 2025年07月10日
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- 文献和实验
- 技术资料
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1年
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10000
- 供应商：
上海信裕
- 保存条件：
室温保存
分子生物学试剂盒为科研人员进行生命科学研究提供了更简单、更快速和更高质量的方法。生工生物通过多年努力，研发了包括质粒提取、胶回收、PCR产物纯化、基因组提取、RNA分离纯化、PCR/RT-PCR、荧光定量、克隆载体和感受态细胞制备等数百种实验常用试剂盒。羊抗人IgM(μ链特异）采用可以特异性结合核酸的硅基质膜和独特的缓冲液系统，可用于提取加入抗凝剂保存的各种新鲜、冷冻血液样品的基因组DNA。可从0.1-1ml血液中快速提取纯化10-40ug纯净的基因组DNA，所得基因组DN**段大，纯度高，质量稳定可靠，可用于各种分子生物学常规试验，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。本试剂盒无需使用酚氯仿等有毒试剂，操作安全。
产品包装：试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT说明书 1份 1份 RT
注意事项：羊抗人IgM(μ链特异）
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物的全血如人全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以羊抗人IgM(μ链特异）免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物的全血如人全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以羊抗人IgM(μ链特异）免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验相关实验
一、实验概要 PCR 扩增目标 DNA 片段。 二、实验原理 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃ 左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2. 模板 DNA 与引物
。 六、模板：PCR对模板DNA的纯度不要求很高，但应尽量不含有对PCR反应有抑制作用的杂质存在，如蛋白酶、核酸酶、TqaDNA聚合酶抑制剂、能与DNA结合的蛋白质。模板DNA的量不能太高，否则扩增可能不会成功，在此情况下可适当稀释模板。 七、引物：引物浓度一般为0.1～0.5μmol/L，浓度过高会引起错配和非特异扩增，浓度过低则得不到产物或产量过低。引物长度一般15～30个碱基，引物过长或过短都会降低特异性。其3’末端一定要与模板DNA配对，末位碱基最好选用A、C、G（因T错配也能引发链的延伸
的 TAQ 聚合酶。 cDNA 第一条链的合成可用不规则六聚体、寡聚(dT)或 PCR 下游引物来启动反应。 如果用寡聚(dT)，一般每次反应加 0.1μL 就够了。如果用下游寡核苷酸作为第一条链 的起始引物，10-50pmol 最为理想。反转录反应以后，加入适量的上游和下游引物进行 PCR 反应与用不规则六聚体方法一样。 三种启动方法中无论用那一种最后得到的扩 增产物都同样理想。而加入不规则六聚体似乎更容易得到前后一致的结果，且靶序列 的合成量通常最多(E.S.K.)加入不规则六聚体方法一样。三种
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