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文献和实验-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys) 可放在N- 或 C-terminus 不影响蛋白折叠和功能,无需移除 分子量 1058Da Twin-Strep-tag® (也有叫做双Strep-tag®II) 28 aa 标签(WSHPQFEK-GGGSGGGSGG-SA-WSHPQFEK) 两段Strep-tag®II标签序列 较Strep-tag®II对于Strep-Tactin®有更高亲和力 分子量 2887Da 二者均为小标签,不会对蛋白质的结构和功能活性产生影响,因此通常不需要在纯化
得到所需的蛋白质,为目前所常用的技术方法。 His-tag系统有很高的蛋白产量(5–40 mg/ml resin),但理想情况下的纯度约为80%左右。但如需在随后的分析中测量蛋白质的功能,就需要再进行更多的cleaning steps。 Strep-tag®系统一步纯化满足的纯度可达到95%,无需进行更多的纯化步骤即可直接进行蛋白的分析。产量数据为16 mg/ml。 深度对比Strep-tag®与His-tag系统 His-tag是以6个组氨酸残基组合的融合标签,其基于蛋白质表面的组氨酸残基侧链
Mouse B cell isolation with magnetic beads
conical tube; 6.Centrifuge cells at 1700 rpm(500 g), 5 min, 4°C; 7. Remove red blood cell : Resuspend cells in ACK to 1 ml/1X10 8 cells, and stand in RT for 1 min. Constant volume to 20 ml/ 1X10 8 cells
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