哺乳动物细胞蛋白抽提试剂

在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计，实验和分析siRNA效应

对siRNA介导的降解更为敏感。候选序列在人类基因组数据库中Blast以避免和其他基因的同源性，最后每个目标靶基因选出对应4个siRNAs。 siRNA合成：分别用化学合成的方法和试剂盒(酶法)制备siRNAs并用常规方法定量。 转染：哺乳动物细胞（Hela）在不含抗生素的完全培养基中生长至 40-70%汇片，分别将每个siRNAs（分别以不同的浓度），转染试剂和Opti-MEM (Invitrogen)混合，室温下孵育15—20分钟，加入siRNAs转染混合物并适当调整培养基的体积。温育48

哺乳动物细胞表达的难点和解决方案，都帮你整理好了

型的蛋白，或进行高解析度的结构分析，愈来愈多的实验组选择哺乳类表达系统来生产融合蛋白。其原因为哺乳动物细胞生产出的重组蛋白与人类蛋白十分相似，有较完整的蛋白折叠、组合及翻译后修饰[3]。因此，愈来愈多科学家们更加关注于—如何从哺乳类细胞中高效的纯化目标蛋白。1 亲和标签的选择首先，需考虑选择合适的亲和标签。常用于哺乳动物表达系统的亲和标签有 His-tag、FLAG-tag、GST-tag及 Strep-tag® 等[4-12]，整理于下表：（点击放大查看）这些亲和标签在使用上各有千秋。使用

哺乳动物细胞siRNA 转染

将制备好的siRNA、siRNA 表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀；电穿孔法；DEAE-葡聚糖和polybrene；机械法；阳离子脂质体试剂。目前用的最多的是阳离子脂质体法。