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- 2026年03月01日
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- 服务名称：
蛋白免疫印迹western blotting
- 提供商：
凯基生物
联系方式：025-52880813/52880839
网址：http://www.keygentec.com.cn
邮箱：service@keygentec.com.cn
地址：南京市江宁区芝兰路18号紫金方山创业特别社区6号楼
邮编：211100
| 蛋白免疫印迹western blotting | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 实验目的：检测组织或细胞中特定目的蛋白的含量。 实验原理：将蛋白样本通过聚丙烯·酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。其中的步骤包括蛋白样本提取制备，蛋白定量，电泳，转膜与显色。
实验材料：
试剂：蛋白(全/核/膜/胞浆）提取试剂盒、蛋白定量试剂盒、SDS凝胶电泳上样缓冲液、电泳缓冲液、封闭液、一抗、二抗、ECL发光液、显影液、定影液。
仪器：匀浆器、紫外分光光度计、bio-rad电泳仪、恒温箱。
实验内容与方法：
1、 蛋白提取：根据需要测定的目的蛋白主要来源（胞浆、胞核或者全蛋白），区分组织提取或者细胞提取，选取相应的试剂盒。
2、 蛋白定量：bradford法、BCA法或lowery法测定出所提取的蛋白含量。
3、 蛋白变性：5×电泳上样缓冲液，煮沸5~10分钟。
4、 凝胶电泳：垂直电泳分离出目的蛋白条带。
5、 转膜：将SDS丙烯·酰胺中的蛋白通过水平电泳的方式转移到PVDF或者NC膜上。
6、 免疫反应：目的蛋白分别与相应的一抗、二抗结合。
7、 显色反应：通过化学发光法将蛋白条带显影至胶片上。
客户提供实验信息：
1、 实验信息（客户提供）：
样本来源： 细胞 种属来源__________ 或 组织 组织来源_________
样本数量：__________ 检测蛋白信息：目的蛋白名称_______________ 蛋白分子量_________
主要表达部位（选填）_______________________ 一抗信息：抗体名称________________________ 种属来源__________
购买公司______________ 推荐工作浓度（选填）_________
2、实验材料提供： （1）样本材料： 新鲜或冷冻细胞不少于106个，新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg。 已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul。 （2）试剂：蛋白提取与定量可根据客户要求选用特定试剂盒，如客户不提供 试剂盒且无特别要求，则选用凯基公司相应试剂盒产品。一抗二抗反应所用抗体客户自备，凯基也可以提供抗体代订服务。 服务周期：（2到8周，根据样本数量而定） 结果提交：提交实验报告书（包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析）、原始数据、图片，文本或电子版。
实验范例：
小鼠骨骼肌组织中myoglobin蛋白电泳条带
beta-actin内参条带
灰度分析
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文献和实验免疫印迹（Western Blotting）的基本原理及应用 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物，然后利用抗原-抗体的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白，从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blotting还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析，作为一种廉价、便捷、可靠的研究工具，将与质谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用
1．简介 Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 2．原理 Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳 ，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗
蛋白质印迹（Western blotting）方法原理和优化
流速。所以在结合前先通过预过滤或离心除去颗粒，只将上清加到膜上。而粘性样品要用缓冲液稀释。 Western印迹 Western印迹含一系列步骤，包括： z 用聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白样品。 z 将胶上的蛋白转移到膜上。 z 鉴定膜上特定蛋白。 下面将从理论和实践方面讨论Western印迹方法。 用1-D或2-D凝胶分离复杂蛋白质混合物 印迹前分离复杂蛋白质混合物的最常见方法是一维（1-D）SDS-PAGE电泳，它根据蛋白质的分子量进行分离。有时用非
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