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- 蛋白免疫印迹western blotting
- 江苏南京
- 2025年12月09日
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- 服务名称：
蛋白免疫印迹western blotting
- 提供商：
凯基生物
联系方式：025-52880813/52880839
网址：http://www.keygentec.com.cn
邮箱：service@keygentec.com.cn
地址：南京市江宁区芝兰路18号紫金方山创业特别社区6号楼
邮编：211100
| 蛋白免疫印迹western blotting | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 实验目的：检测组织或细胞中特定目的蛋白的含量。 实验原理：将蛋白样本通过聚丙烯·酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。其中的步骤包括蛋白样本提取制备，蛋白定量，电泳，转膜与显色。
实验材料：
试剂：蛋白(全/核/膜/胞浆）提取试剂盒、蛋白定量试剂盒、SDS凝胶电泳上样缓冲液、电泳缓冲液、封闭液、一抗、二抗、ECL发光液、显影液、定影液。
仪器：匀浆器、紫外分光光度计、bio-rad电泳仪、恒温箱。
实验内容与方法：
1、 蛋白提取：根据需要测定的目的蛋白主要来源（胞浆、胞核或者全蛋白），区分组织提取或者细胞提取，选取相应的试剂盒。
2、 蛋白定量：bradford法、BCA法或lowery法测定出所提取的蛋白含量。
3、 蛋白变性：5×电泳上样缓冲液，煮沸5~10分钟。
4、 凝胶电泳：垂直电泳分离出目的蛋白条带。
5、 转膜：将SDS丙烯·酰胺中的蛋白通过水平电泳的方式转移到PVDF或者NC膜上。
6、 免疫反应：目的蛋白分别与相应的一抗、二抗结合。
7、 显色反应：通过化学发光法将蛋白条带显影至胶片上。
客户提供实验信息：
1、 实验信息（客户提供）：
样本来源： 细胞 种属来源__________ 或 组织 组织来源_________
样本数量：__________ 检测蛋白信息：目的蛋白名称_______________ 蛋白分子量_________
主要表达部位（选填）_______________________ 一抗信息：抗体名称________________________ 种属来源__________
购买公司______________ 推荐工作浓度（选填）_________
2、实验材料提供： （1）样本材料： 新鲜或冷冻细胞不少于106个，新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg。 已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul。 （2）试剂：蛋白提取与定量可根据客户要求选用特定试剂盒，如客户不提供 试剂盒且无特别要求，则选用凯基公司相应试剂盒产品。一抗二抗反应所用抗体客户自备，凯基也可以提供抗体代订服务。 服务周期：（2到8周，根据样本数量而定） 结果提交：提交实验报告书（包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析）、原始数据、图片，文本或电子版。
实验范例：
小鼠骨骼肌组织中myoglobin蛋白电泳条带
beta-actin内参条带
灰度分析
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