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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
南京赛泓瑞
- 规格：
200units
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文献和实验通过加入基因组 DNA 模板以及设计好的引物进行目的基因的扩增，得到 PCR 产物后进行琼脂糖凝胶电泳验证条带大小，然后通过胶回收，获得纯化目的片段产物。由于加入保护碱基，回收产物需要进行限制性内切酶切从而暴露黏性末端。2. 线性化质粒：将原始的质粒载体，比如 pcDNA3.1 质粒，选择合适的酶切位点，比如 NheI/KpnI 进行酶切，获得线性化的质粒。酶切体系一般选择 50ul，试剂加好之后 37°C 孵育 6~8 小时，或适当延长时间，保证质粒酶切完全。每隔一段时间振荡一下并离心以防液滴蒸发
通过加入基因组 DNA 模板以及设计好的引物进行目的基因的扩增，得到 PCR 产物后进行琼脂糖凝胶电泳验证条带大小，然后通过胶回收，获得纯化目的片段产物。由于加入保护碱基，回收产物需要进行限制性内切酶切从而暴露黏性末端。2. 线性化质粒：将原始的质粒载体，比如 pcDNA3.1 质粒，选择合适的酶切位点，比如 NheI/KpnI 进行酶切，获得线性化的质粒。酶切体系一般选择 50ul，试剂加好之后 37°C 孵育 6~8 小时，或适当延长时间，保证质粒酶切完全。每隔一段时间振荡一下并离心以防液滴蒸发
will99_04 小弟想用pGL3-vector basic作为载体装载一个启动子片段，该启动子片段需要经PCR克隆，故要设计引物，在引物的5‘端加入内切酶位点。经过查询后发现可以用一下三种内切酶：KpnI，NheI，MluI 查TAKARA的产品目录后发现，这三种酶的反应温度均为37°，但所用缓冲液不同。 提问：有没有适合两种酶（从上述三种同时反应的universal buffer（通用缓冲液）？ devil19840
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