Western blot 免疫印迹（WB）

免疫印迹immunoblotting
免疫印迹immunoblotting又称蛋白质印迹western blot，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

实验步骤
需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液，阳性对照样品（如果有）， 组织样品不少于50mg；细胞不少于5×106个；总蛋白浓度不低于 2μg/μl（至少50μl）。

服务基本流程
1. 蛋白提取和定量（如果提供蛋白样品，则直接电泳预实验检测抗体特异性）；
2. SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙*酰胺凝胶电泳；
3. 转膜（PVDF膜）；
4. 封闭 （5%脱脂奶粉）；
5. 一抗孵育（其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1）；
6. 二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续，则收相关预实验费用）；
7. 显色（ECL）；
8. 曝光、洗片、灰度分析；

结果展示：



实验周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准: 1、曝光结果（胶片和扫描图）及灰度值；
2、详细实验报告，含所需试剂耗材、仪器设备及操作过程等。

收费标准

细胞平台	行为学检测	动物模型
原代细胞制备与培养	水迷宫检测	慢性胰腺炎模型
细胞培养、传代	十字架	肝纤维化模型
原代细胞传代培养		非酒精性脂肪肝
细胞系STR鉴定服务	动物模型	骨质疏松模型
细胞转染	小/大鼠饲养	糖尿病模型
MTT细胞增殖、活性、毒性检测	小/大鼠灌胃	眼外伤模型
CCK8细胞增殖、活性、毒性检测	兔子饲养费	青光眼模型
流式细胞凋亡检测	大鼠灌胃	烧烫伤模型
流式细胞周期检测	小鼠灌胃	短肠模型
血管形成实验（非钙染/钙染）	兔子灌胃	肾衰模型
ROS检测	腹腔/肌肉给药（大小鼠）	肾炎模型
划痕实验	腹腔/肌肉给药（兔子）	尿路结石
克隆形成实验	尿液/粪便采集	高氧/低氧损伤模型
粘附实验	血液采集
transwell实验（迁移）	TTC染色	病理平台
transwell实验（侵袭）	超声检测	组织包埋
贴壁/悬浮细胞转细胞株构建	血常规检测	冰冻/石蜡切片
耐药细胞株筛选构建	DR检测	HE染色
	骨组织切片	其他特殊染色
分子平台	microCT	全扫描拍照
载体构建	皮下瘤模型	扫描电镜
细胞/组织/血液RNA提取	移植瘤模型	透射电镜
mRNA/miRNA等引物设计	原位瘤模型	共聚焦拍照
RT-qPCR检测	心肌缺血再灌注模型
CHIP检测	门静脉高压动物模型
EMSA检测	高血压动物模型
双荧光素酶实验	心肌梗死动物模型
原位杂交	动脉粥样硬化动物模型
	脑缺血再灌注
免疫平台	肾性高血压模型
蛋白（核/膜/总）提取	主动脉弓狭窄模型
蛋白含量测定	脊髓损伤模型
Western Blot检测	背根神经节损伤模型
COIP	脑瘫模型
免疫组化/荧光	癫痫模型
	抑郁症模型
行为学检测	肾脏缺血再灌注模型
水迷宫检测	关节炎
十字架	肺气肿模型

六、实验服务流程



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