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见说明书
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100
- 供应商:
上海远慕生物
- 保存条件:
室温,12个月
上海远慕生物科技有限公司生产的: 高盐TE缓冲液(1mol/L,pH8.0) 主要用于:CTAB法提取植物DNA后保存液 产品组成及特殊说明:主要由10mMTris-HCL、0.1mMEDTA、1M氯化钠等组成。
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文献和实验本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)EDTA 50mmol/L (pH8.0)NaCl 500 mmol/L灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L(2)裂解液20%SDS(3)高盐溶液5mol
加入5 ml 提取缓冲液,混合后,65 ℃水浴10min ,离心,取上清,合入上述上清液;重复一次;加入等体积的氯仿混合,5 000 r・min - 1离心20 min ,取上清;加入0.6 倍体积的异丙醇,室温沉淀1 h ;20~25 ℃,12 000 r・min - 1离心20 min ,TE 溶解沉淀. SDS-酚氯仿抽提法(方案3) 具体步骤:称取1g土壤样品,加入1ml 0.1mol/l PH8.0 磷酸缓冲液,玻璃珠振荡1min。溶菌酶5mg,使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15
,取上清,合入上述上清液;重复一次;加入等体积的氯仿混合,5 000 r·min - 1离心20 min ,取上清;加入0.6 倍体积的异丙醇,室温沉淀1 h ;20~25 ℃,12 000 r·min - 1离心20 min ,TE 溶解沉淀.SDS-酚氯仿抽提法(方案3) 称取1g土壤样品,加入1ml 0.1mol/l PH8.0 磷酸缓冲液,玻璃珠振荡1min。溶菌酶5mg,使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15min,放置冰箱30min,加125μl 20%SDS振荡处理15min,离心
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