内源性生物素封闭液

灭活内源性酶及封闭内源性生物素

灭活内源性酶及封闭内源性生物素 在生物体组织内均含有一定量的内源性酶和内源性生物素，如富含血细胞的组织标本有大量具有活性的过氧化物酶，肝、脾、肾、脑及胚胎组织中富含生物素。 如采用过氧化物酶检测系统或碱性磷酸酶和NBT/BCIP显色系统进行免疫组织化学染色时．酶的作用是催化底物，使显色剂显色，而组织中的内源性酶同样也能催化底物，使其显色，这就影响免疫组织化学染色的特异性。在使用亲和素试剂的免疫组织化学染色中，内源性生物素易结合亲和素，形成亲和素一生物素复合物，导致假阳

为什么你做出来的 Western 背景很脏？原因也许是……

是不是做 Western 的时候，会遇到这样的情况呢？没错，就是背景很脏。造成背景脏的原因有很多，比如一抗没洗干净，或者二抗没洗干净，还有就是封闭的时候不完全。但其实，封闭液也是你们很容易忽略的一个环境哈。封闭液有几种？除了脱脂奶粉和 BSA 还有啥你们能想到的？第一种封闭液就是脱脂奶粉，这是异常便宜的封闭液品种，当然也应该是你们最常用的封闭液配方了。（甚至我们用过特仑苏）但是，你们应该注意到的是，脱脂奶粉中有大量的生物素，也就是说你做的蛋白要是用生物素标记的，一抗也是抗生物素的。那用脱脂

免疫组化背景深、特异性差？IHC Troubleshooting 指南

DAB显色，血液丰富的组织尤其容易出现干扰。 染色前需要使用H₂O₂或配套封闭液处理内源性过氧化物酶。可以设置一张不加一抗、直接进入检测和显色体系的切片进行判断，如果仍出现明显棕色信号，需要优先检查内源性酶和检测系统。 使用ABC等生物素放大体系时，还要考虑肝脏、肾脏等组织中的内源性生物素。背景明显时可增加avidin/biotin封闭，或改用非生物素聚合物检测体系。   4. 一抗浓度太高：最常见的高背景原因之一 一抗并不是越浓信号越可靠。浓度过高会增加低亲和力和非特异性结合，常见表现是目标