乙醇-福尔马林-醋酸溶液

FFPE 样本前处理过程及注意事项

患者活检或手术标本的研究对于阐明疾病尤其肿瘤的发病机制、指导治疗方案来说非常重要。但是活体组织一旦离体，血氧供应停止，就会产生一系列生物化学和组织形态学的改变，直至发生自溶，干缩，腐败，核酸和蛋白也会迅速降解，因此需要及时固定。福尔马林固定、石蜡包埋 (Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE) 技术能够在组织离体后最大程度地保存其原有的形态学结构及生物学信息，成为肿瘤研究领域中疾病诊断和科学研究中非常常见的生物学材料。 在分子病理学高速发展的今天

不同样本破碎和匀浆中常见问题及解决方案

样本采集和快速冷冻的时间。 2. 即时加入 RNA 稳定剂，使组织内的 RNase 失活及保护组织中的 RNA。 3. 快速匀浆，加入裂解液若粘稠至不能有效分层，可继续加入更多裂解液。 4. 采用 RNeasy Mini Kit（货号：74104）提取时，可将缓冲液 RLT 中加入的巯基乙醇含量提高至 3%-5%，能够有效改善结果。   血液样本 提取得到的 RNA 量少；由于 RNase 得到的 RNA 完整性较差，有降解；污染物包括抗凝剂-肝素和 EDTA，以及天然酶抑制剂影响下游 RNA

TSA多重免疫荧光染色的实验步骤

实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原