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12孔板专用无菌细胞爬片
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文献和实验细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的,现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享,如有不当的地方还望大家给与指正: 【爬片的准备】 1、爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片; 2、应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板; 3、将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了),放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后进行高压消毒。 【培养
一、摘要 目的:建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法:成年新西兰白兔两只(正常及梗阻各一只),采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于10%小牛血清的DMEM中培养,观察细胞形态和扩增情况,用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白(α-actin)鉴定细胞类型。结果:倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片HE染色及电镜检查均证实为平滑肌细胞。免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应。从细胞爬片HE染色和免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应中我们发现该方法所的膀胱平滑
培养操作过程:注意无菌。无论哪一管液体,开盖后尽量立即关上(如果有几瓶都需要开的,也注意,可以虚盖)。盖子向上放。操作时不要从开盖的容器上方经过。另外,无菌台面上摆放的各种东西,最好是一字摆开,平行于自己。尽量不要前后重叠。细胞操作中所用的所有耗材试剂最好都是细胞培养专用。一般都以一次性耗材居多。1ML枪头为加长型专用培养枪头。移液管亦有专用10mL一次性无菌移液管(1)细胞换液:培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液,加入新培养液。(2)细胞传代:传代之前先观察,细胞是否密集,是否开始融合。一般融合
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