15ML离心管，带架，货号：430790

类器官培养与应用——血管类器官

%、且大部分无分化的状态时，吸出培养基。 3、向 hPSCs 中加入 0.5 mM EDTA 洗涤细胞一次。 4、吸去 EDTA 溶液，每孔加入 0.6ml Accutase，并将培养皿放置在 37℃ 解离约 3-5min，直到所有的细胞变圆。 5、向每个孔中加入 5ml 的 hPSCs 培养基，并用 0.1% 台盼蓝进行染色计数。 6、将所有细胞转移至 15ml 离心管中，室温下 300g 离心 3min，收集沉淀细胞。6 孔板中每孔接种 2×105 个细胞，加入预热的 3ml hPSCs 培养

用 CD3/CD28 做好 T 细胞激活与扩增

细胞筛网置于培养皿中，取小鼠脾脏放置于筛网中，加入 5ml 达优小鼠淋巴细胞分离液，对脾脏轻轻进行研磨（注：此步操作要快，避免分离液蒸发）； 2. 把悬有脾脏细胞的的分离液立即转移至 15ml 离心管中，随后在分离液上层轻轻覆盖 500-1000μl 的 RPMI1640 培养基（保持分离液与培养基分界明显）； 3. 室温，水平转子 800g 离心 30 分钟，设置离心机为缓升缓降； 4. 离心结束后吸出淋巴细胞层（白膜层），加入 10ml RPMI1640 洗涤一遍细胞，250g 离心 10

类器官培养与应用——结直肠类器官

、将细胞悬液转移至 15ml 离心管中，加入 10ml 预冷的 DMEM/F12 培养基（含10% FBS）。4℃ 条件下 300g 离心 5min，取细胞沉淀。 23、将所得沉淀重复 10-13 步骤，完成 CRC 类器官复苏。 图 2. 显微镜下 CRC 类器官的形态，以及 Ki-67、E-Cadherin 标记物的表达【5】 利用类器官技术，能够将 CRC 和正常结直肠组织在体外进行长期扩增，并且在微卫星稳定（MSS）来源的 CRC 类器官中发现，类器官模型能够保留样本的遗传多样性和形态稳定