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双荧光素酶载体,miRNA结合
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上海吉玛
H00001
microRNA靶基因荧光素酶报告载体
吉玛采用Promega的psicheck2.0的载体系统完成靶基因3’ UTR质粒载体构建服务。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR构建。
psicheck2.0报告基因检测系统用来检测siRNA/miRNA与靶基因是否可能存在调控作用,该报告系统报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR区域,通过对该荧光的监测,即可验证siRNA/miRNA对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参,用于监测质粒表达效率。
严格的实验体系,要求miRNA与mRNA 3’ UTR验证实验中需要构建靶mRNA的点突变载体,以验证靶点作用有效性。突变载体构建主要依据预测的miRNA与靶基因3’UTR的稳定结合区域(即种子区)。通过种子区全部碱基或部分碱基突变导致miRNA与靶基因3’UTR区域的结合能力大大降低,从而判断是否存在miRNA的调控作用。
完成miRNA靶基因报告基因载体构建,需要客户提供:miRNA具体信息,预测靶基因信息,miRNA与靶mRNA结合位点信息。
a. 靶基因3’ UTR长度须小于500bp,否则价格及合成周期另计;
b. 单位点(即1个miRNA-mRNA作用位点) 突变价格如上,多位点突变价格及合成周期另计。
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