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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
2年
- 英文名:
Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
- 库存:
大量
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
-20 ºC避光保存
- 规格:
50T(40301ES50)/100T(40301ES60)
| 规格: | 50T(40301ES50) | 产品价格: | ¥298.00 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100T(40301ES60) | 产品价格: | ¥528.00 |
产品描述
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法对细胞周期与细胞凋亡进行分析。
碘化丙啶 (Propidium,PI) 是一种双链DNA荧光染料,其嵌入双链DNA后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,根据DNA含量的分布情况,进行细胞周期和细胞凋亡分析。
PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化 (DNA fragmentation) 导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。
细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散射色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。
本试剂盒通常应用于贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。
产品组分

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编号 |
组分 |
产品编号/规格 | |
|
40301ES50(50 T) |
40301ES60(100 T) | ||
|
40301-A |
RNase A Solution |
0.5 mL |
1 mL |
|
40301-B |
PI Solution |
0.5 mL |
1 mL |
|
40301-C |
Staining Solution |
25 mL |
50 mL |
运输与保存方法
运输:冰袋(wet ice)运输。
保存方法:-20℃避光保存,有效期为2年。
【注】如果需要在短时间内多次重复使用,可以于4℃避光保存,2个月内有效。
注意事项
1)本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。
2)细胞处理需轻柔,尽量避免人为的损伤细胞。
3)为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差,可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数生长期,贴壁细胞一般在50~80%汇合度时收集为宜。
4)400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉,留下单细胞,否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤,请在染色之前将细胞轻弹以分散,再进行染色。
5)荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
6)操作碘化丙啶时,应注意防护,保护眼睛、避免吸入。
7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8) 本产品仅作科研用途!
使用方法
1)细胞样品制备:细胞数量控制在1×105~1 × 106个。
a)贴壁细胞:小心吸除细胞培养液,用胰酶消化细胞,制备成单细胞悬液。1000rpm/min离心5 min,沉淀细胞,弃上清,用1 mL预冷的PBS润洗细胞一次,离心收集细胞。
b)悬浮细胞:1000rpm/min离心5 min,沉淀细胞,小心吸除上清。加入1 mL预冷的PBS,重悬细胞,再次离心收集细胞。
c)组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1 h,经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000rpm/min离心5 min,沉淀细胞。加入约1 mL预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。如组织难以消化,可加入适量胶原酶。
2)细胞固定:细胞沉淀用1 mL预冷的70%乙醇轻轻混匀,4℃固定2 h以上或者过夜。接下来1000rpm/min,离心5 min沉淀细胞后,用1 mL预冷的PBS重悬。然后再次1000rpm/min离心5 min沉淀细胞。
【注】:凋亡检测不需要固定,细胞周期检测需要固定。
3)染色:
在0.5 mL染色缓冲液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶储液(40301-B)和10 μLRNase A(40301-A)溶液,混匀待用。每个细胞样品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色液,轻轻混匀重悬细胞。37℃避光孵育30 min,就可以进行流式检测,流式检测最好在5 h内完成。
【注】:配置好的PI染色液在短时间内可以4℃保存,宜当日使用。
4)流式检测和分析:细胞用400目筛网过滤,用流式细胞仪进行检测,在激发波长488 nm波长处检测,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
HB220914
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Cellometer图像细胞功能分析仪,不仅仅可以进行细胞计数和细胞活力分析,还 可轻松、精确进行细胞周期,凋亡,GFP表达的分析 CellometerK2双荧光细胞活力分析仪和CellometerVISIONCBA双荧光细胞功能分析系统 不仅仅可以快速、准确检测细胞浓度和细胞活力,而且进行多种细胞功能分析。如下图:细胞周期分析通过 FCSExpress流式软件,可轻松获得“类流式”分析数据不仅提供研究者流式结果,还提供可视的细胞图像凋亡分析可进行 AnnexinV,Caspase
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
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