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- 实时定量PCR实验
- 北京
- 2025年07月11日
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GENELIFE
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实时定量PCR实验
GENELIFE 技术服务中心目前使用的仪器为美国Applied Biosystems公司最新推出的ABI7900HT型高通量实时荧光定量PCR系统。由于其在定量PCR系统领域的领先地位，优越的配置，精准的实验数据，加上快速高通量的强大功能，使得该系统已经成为各大医院，科研机构的首选。
可以提供的Realtime－PCR实验服务包括 TaqMan荧光探针法和SYBR Green荧光染料法。
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文献和实验PCR反应通过变性、退火、延伸三个循环步骤，使目标DNA片段曾指数扩增。 因此，PCR系统是一个极其灵敏的信号放大系统，能将极微弱、甚至是单拷贝的基因信号检测出来。 但是常规的PCR不能反映起始样本中目的基因的含量水平，从而限制了它在临床检测中的应用。 荧光定量PCR是指通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析的一项新技术。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根
内参照定量PCR PCR可分析极微量的DNA，并可同时扩增多种序列，已应用于基因转录水平的研究。尽管PCR是一种较理想的核酸定量方法，但实验方案的选择对PCR定量的成功与否极为重要，因为PCR是一个指数过程，控制反应率的任一参数的微小变化都会显著影响产物的生成量，在这些参数被精确优化与控制后，也还可能出现不同反应管中的产物量的差异，而导致结果的偏差。 设置内参照是理想的定量方法，它使定量测定mRNA工作变得较为简单易行，这一类方法已较为广泛地应用，下面介绍两种常用的方法
1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右，一般有什么方法解决？ ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此最好能够把ct值往前移。 解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。 2. 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带，而内参用同样体系就没有呢? 引物被污染。 3. 实时定量PCR
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