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- 2025年07月15日
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- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 品牌：
Pharmacia
- 货号：
PDS 279401-01
- 质粒类型：
环形
- 产地：
USA
- 质粒骨架：
双链
- 质粒大小：
4522bp
- 耐菌性：
氨苄
- 蛋白标签：
E-tag
- 规格：
套/kit
1.载体：pCANTAB5e
2.辅助噬菌体：M13K07
3.融合表达宿主菌：TG1
4.可溶性表达宿主菌：HB2151
5.建库操作实用技术手册（中文）
6.全程建库技术服务，提供实时解决方案。
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- 内容
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文献和实验-PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因(VH，VL)，PCR扩增条件为：94℃ 1?min，55℃ 2?min，72℃ 2?min。循环30次。用Linker将等摩尔量的VH，VL交联形成单链抗体可变区片段(ScFv)。经NotⅠ、SfiⅠ双酶切后，在T4连接酶的作用下与经同样双酶切的pCANTAB5E载体相连，转化入大肠杆菌TG1以构建鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库。在援救噬菌体抗体库后，用内毒素淘筛特异性的ScFv，富集的噬菌体阳性克隆 重新感染TG1。然后在96孔板分别援救单个含特异性ScFv
），在PCR扩增ScFv基因的过程中，在ScFv基因片段5端、3端分别引入SfiI和NotI酶切位点，ScFv基因PCR扩增产物经SfiI和NotI酶切后，重组到pCANTAB 5E载体相应的酶切位点中，构建噬菌粒表达载体pCANTAB5Ecd20scFv。3、抗CD20 ScFv 噬菌体显示文库建立、筛选及鉴定采用电穿孔方法将pCANTAB5Ecd20scFv质粒转入TG1细菌中，接种2YTAG培养基，37℃，200rpm摇床培养至OD600为0.8，加入M13K07辅助噬菌体（4109 pfu/ml
噬菌体展示抗体库构建的载体 抗体库技术是将某种动物的所有抗体可变区基因克隆在质粒或噬菌体中表达，利用不同的抗原筛选出携带特异抗体基因的克隆，从而获得相应的特异性抗体 单链抗体（ScFv）是一种基因工程抗体，能够在原核宿主中表达，不论是在性能方面，还是在制备方面，均具有独特的优越性。关于基因工程抗体的特点与制备过程，见本书第一章的有关内容。这里仅介绍噬菌体展示技术在制备单链抗体中的应用，说明该技术的操作过程。 pFUW80是一个多拷贝的噬菌粒载体,用于表达单链
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