81孔塑料冻存盒（适用于1.8-2ml冻存管）

养细胞就跟养娃一样，过来人告诉你几点经验

方面对某些细胞（如 HBE4-E6/E7 肺上皮细胞）的毒性也过大。对于这些细胞，则应使用甘油。甘油可以通过高压蒸汽灭菌，而 DMSO 只能通过过滤除菌。DMSO 或者甘油至少应达到试剂级（或者更高级别，如细胞培养级），并且分装，避光保存。 3 细胞冻存的速率有很多方法可以实现 1℃/min 的降温速度。电脑控制的可编程电子降温系统是最好的方式，可以精确保持降温速度。这也是 ATCC 唯一采用的方法。但这种设备价格较高。比较经济的方式是将冻存管放置于冻存盒中，在低于 –70℃ 的冰箱中冻存 24 小时。已有

人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南

内胚层 (AFE) 细胞后的第 8 天，应观察到较高细胞密度。下面的方案提供了 6 孔板型的参考接种密度。其他板型的接种密度需做调整 1. 从培养箱中取出含第4天定型内胚层培养物的6孔板。 2. 从每个孔中吸出培养基。用2ml 1X PBS (BSS-1006-B)洗净每孔。 3. 每孔加入1ml Accumax™溶液(A7089)，分离定型内胚层细胞。37°C孵育6-8分钟。 4. 5分钟后，目测检查培养板。轻轻敲击培养板的边缘，使细胞进一步分离。大多数细胞应该分离开并悬浮于液体中。如果不是，再孵育2分钟

小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

的培养基中进行扩增。 1、PBS洗涤，加入1-2ml 胰酶 2、37℃孵育5分钟 3、用4mlEB培养基终止胰酶活*，将细胞转入锥形管中放置3～5分钟移出细胞团，将上清移入一新的离心管离心。 4、将细胞重悬于含有bFGF的N3培养基。 5、将细胞接种在包被多聚-L-鸟氨酸/纤维连接蛋白的盖玻片上（最好将盖玻片放于24孔培养板或6孔培养板，6孔培养板中每孔放置5个盖玻片如果是塑料的放置4个，以使最大可能的获得样品数量）。24孔板接种3.5×105/孔或6孔板1.7×106 /孔