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上海远慕生物
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500ml
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文献和实验-HCl,1 mmol/L EDTA。 (10)NTE缓冲液:500 mmol/L NaCl,10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA pH8.0 (11) 预杂交缓冲液:含50%去离子甲酰胺的4×SSC (12)NBT/BCIP液:(NBT:氯化氮四唑蓝,BCIP:5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐) A、将10 mg NBT溶于200 ml 二甲基甲酰胺中。 B、于37℃加入1ml底物缓冲液(50 mmol/L Tris HCl PH
一、地高辛(Dig)标记DNA探针在石蜡切片上的检测方法 1. 组织切片的预处理 (1)固定:组织以10%中性福尔马林液,常规石蜡包埋,切片厚4-6 μm,最好用硅化玻,60℃烤片6-8 h。 (2)脱蜡至酒精。 (3)入0.2 mmol/L HCl 20 min 去除蛋白。 (4)50℃2×SSC,含5 mmol/L EDTA溶液中30 min。 (5)蛋白酶K(1 μg/ml 溶于0.1 mol/L PBS中),37℃20-25 min。 (6)0.2
尼龙膜在某些方面比硝酸纤维素膜好,它的强度大、耐用,可与小至10bp的片段共价结合。在低离子浓度缓冲液等多种条件下,它们都可与DNA单链或RNA紧密结合,且多数膜不需烧烤。尼龙膜韧性好,可反复处理与杂交,而不丢失被检标本。它通过疏水键和离子键与核酸结合,结合力为350~500μg/cm2,比硝酸纤维素膜(80~100μg/cm2)强许多。尼龙膜的缺点是对蛋白有高亲合力,不宜使用非同位素探针。
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