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CFSE 5 x 500 ug
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文献和实验细胞仪检测分析,通过检测到细胞荧光强度不断的降低,进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。二、CFSE配制用DMSO溶解成5 mmol/L的储存液,于- 20 ℃避光保存。使用时,用无血清DMEM培养液稀释成5μmol/L的工作液备用。CFSE试剂盒内有一小瓶CFSE(A试剂)标明500ug ,另有一小瓶DMSO(B试剂),500ugCFSE溶解于180ulDMSO即是5mMstock solution。三、CFSE标记细胞制作细胞悬液,加入等体积CFSE工作液,于37℃孵育10 min,用40%体积的冷小牛血清立即终止
离心5分钟1.6.将上清倒去,使用FA裂解液将沉淀重悬浮(1x107cells/750μl).初始细胞要有1*107-5*107个,采用终浓度为0.75%甲醛和如上描述的甘氨酸处理。预冷PBS洗3次,1,000g离心5分钟,沉淀用FA裂解液重悬浮。2 超声破碎超声裂解细胞悬液可以将DNA均一的打断成500-1000bp的片段。不同的细胞系需要不同的超声时间才能达到最优效果。交联细胞要通过时间梯度的超声来选择最优超声条件。样品通过时间梯度,DNA的分离如部分3所描述。片段大小序在1.5%的琼脂
M199 + 35g NaHCO3 + 25mM Hepes + 5 mM glutamine + 50 ug/ml Gentamycin.1M Hepes: 119.1 g Hepes + 500 ml dH2 O.Media A: 1X HBSS (10X:50ml) + 10 mM Hepes (1M: 5 ml) + 5 mM EDTA (0.5M: 5ml) + 2.5 % FBS (12.5 ml) in 500 ml.Media B: RPMI1640 470 ml + Gent
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