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文献和实验实验材料: 1. 细胞来源:新生儿包皮; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. 0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液:两者比例为1:1,用D-Hanks液配制; 4. 0.02%大豆胰蛋白酶抑制剂:用DMEM培养液配制; 5. 生长基质:人纤维连接蛋白,按10μg/cm2 包被培养皿; 6. DMEM培养液:DMEM培养基,加10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100
,一般多用的浓度是0.02% 可以用不含钙镁的平衡盐溶液溶解,水也可以然后灭菌分装,你可以用稍微量大一点的胰酶而不用EDTA,要是直接都用EDTA你的细胞要是都能消化下来,也是可以的,但是注意消化以后用HANKS 来清洗残留的EDTA。 wangruimishu 可能是我的细胞比较容易存活的原因吧,我只用EDTA消化,细胞长的还可以,只是感觉消化的慢 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄
Arginine 0.25 mM EDTA 0.2mM PMSF 0 M 尿素 溶液pH调节到8.0 透析24小时 10mM Tris-HCl pH8.0 150mM NaCl, 1mM EDTA 0.02% NaN3. 透析24小时 透析时注意透析袋的截留分子量 下面的工作就简单了,因为复性的蛋白已经在生理缓冲液中,进行阴阳离子交换层析爱怎么整就怎么整它了。
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