ECL Plus超敏发光液 A液和B液各12.5ml

ECL Plus 超敏发光液
ECL Plus 超敏发光液使用说明书
货号：PE0010
规格：25ml/100ml

保存：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室温放置数月不影响质量。


产品简介：
ECL Plus 超敏发光液直接或间接检测与辣根过氧化物酶 HRP 关联的蛋白或核酸底物。这一独特的发光底
物系统是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂，具有极高灵敏度和高信噪比，可检测出 10-100 fg 的微量抗
原；发光迅速，荧光可使 X 感光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测。同时该试剂允许
使用更高的抗体稀释倍数，（1：2000-1：10000），极其节省抗体。
用途：用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。
安全性：无特殊毒性，按普通化学品处理。


使用方法：
1、常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用HRP标记IgG或用一抗-链亲和素-生物
素-HRP夹心法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交，洗膜。
2、在洗涤膜上的HRP标记二抗的同时，新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液A和B混合，放置使之升
到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有减低。
3、用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液（0.125ml发光
工作液/cm 2 膜）充分接触。室温孵育 3 分钟后立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝
光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利于反应进行，也会导致膜上条带曝光不
均匀和灵敏度明显降低。为达节约目的可将膜减小但勿降低发光液用量。
4、用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
5、在X光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹杂
交膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的
保鲜膜固定在暗盒内，最好蛋白带面向上。
6、在黑暗中放入X感光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。


注意事项：
1、步骤 1-5 可在日光灯下操作；但发光液暴露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避
免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的洁净。
2、长时间曝光或蛋白质过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
3、 发光工作液孵育约 3 分钟后膜上的条带发光。 强条带发光在暗房中肉眼可见， 低丰度蛋白条带发光较弱，
肉眼虽不可见但能使 X 胶片曝光。不能单凭肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小
时并使 X 胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，
然后重新用 ECL 发光和曝光。
4、 由于超敏发光液的高灵敏度， 强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1： 1000-1： 4000， 二抗 1： 2000-1：
5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败！
5、某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜，例如“克林莱”牌保鲜膜。
6、 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可帮助确定胶片上条带的准确位置和大
小。
7、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收二抗时应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。


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参考文献：
《Glutamine Enhances the Hypoglycemic Effect of Insulin in L6 Cells via Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K)/Protein Kinase B (AKT)/Glucose Transporter 4 (GLUT4) Signaling Pathway》 作者:Caijuan Wang, Yujiao Deng, Yenan Yue, Wenting Chen, Yu Zhang, Guifang Shi, and Zhongming Wu 期刊:Medical Science Monitor 影响因子:1.98 PMID:29491345
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《C14orf159 suppresses gastric cancer cells’ invasion and proliferation by inactivating ERK signaling》 作者:Yan-Mei Zhu,Qiang Li, Xiao-Zhuo Gao, Xiao Meng, Li-Li Sun,Yu Shi,En-Tian Lu and Yong Zhang 期刊:Cancer Management and Research 影响因子:2.243 PMID:30863180
《Study of As2O3 regulating proliferation and apoptosis of Tca8113 cells by inhibiting the expression of Id-1》 作者:Yanfeng Zhu, Weihui Chen, Weiqun Guan, Yihong Fang & Chunfeng Hao 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影响因子:4.462 PMID:31079498
《Sphingosine-1-Phosphate Improves the Biological Features of Mouse Bone Marrow-Derived EPCs Partially through PI3K/AKT/eNOS/NO Pathway》 作者:Xia Wang， Enxin Zhan ，Guohua Lu ， Qingjie Mu， Tianliang Zhang and Nana Yang 期刊:Molecules 影响因子:3.06 PMID:31261859