- ￥408 - 98000
- 翌圣生物
- 20395ES
- 中国
- 2026年10月23日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
UCF.ME® Recombinant Enterokinase (His Tag) 重组肠激酶（His标签）
- 供应商：
翌圣生物
- 保存条件：
-15~-25℃保存，有效期2年。
- 规格：
100 U(20395ES60)/500 U(20395ES76)/5000 U(20395ES90)/100 KU(20395ES92)/1 MU（1000 KU）(20395ES94)
| 规格： | 100 U(20395ES60) | 产品价格： | ￥408 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500 U(20395ES76) | 产品价格： | ￥1188 |
| 规格： | 5000 U(20395ES90) | 产品价格： | ￥3888 |
| 规格： | 100 KU(20395ES92) | 产品价格： | ￥19800 |
| 规格： | 1 MU（1000 KU）(20395ES94) | 产品价格： | ￥98000 |
产品描述：
重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，其氨基酸序列与牛源肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys（DDDDK），可用于去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，保障重组融合蛋白准确的N端序列，同时重组肠激酶具有比天然酶更高的切割活性。
翌圣重组肠激酶（His标签）为采用毕赤酵母分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品带His标签，在切割反应完成后，可通过Ni2+亲和柱轻松去除，极大地简化了后续的纯化流程。
翌圣为您提供蛋白纯化实验整体解决方案，相关产品选购请参考：蛋白纯化系列产品-选购指南
产品特色：
特异性强：特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：Asp-Asp-Asp-Asp-Lys；
纯度高：不含其他蛋白酶，无非特异性切割；
无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料；
质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定；
产能充足：翌圣拥有5L-1500L不同体系发酵罐，满足不同客户不同阶段对于产品批量要求；
不同等级产品供应：R&D级别（20395ES）、GMP级别（20396ES），GMP级别产品符合ISO 13485质量管理体系。
产品性质
| 来源（Source） | 毕赤酵母重组表达 |
| 分子量*（Molecular Weight） | 理论值22.7 kDa |
| 外观（Appearance） | 无菌液体 |
| 蛋白保存液（Storage Buffer） | 50 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 50% Glycerol, pH8.0 |
| 酶浓度（Enzyme Concentration） | 5 U/μL |
| 纯度（Purity） | ≥95% |
| 活性定义*（Activity Definition） | 一个活性单位定义为25℃条件下，酶切12-16 h，在缓冲体系（20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 2 mM CaCl2, pH 8.0）缓冲体系下，将50 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白（翌圣肠激酶酶切阳性底物，分子量约64.6 KDa，Cat#20391ES）切开95%所需要的酶量。 |
分子量：*由于毕赤酵母表达后糖基化的影响，SDS-PAGE显示目的蛋白的分子量约40 kDa。
活性定义：*不同底物，酶切效率可能不同；一般蛋白越小，切割效率越高，翌圣酶活定义为采用分子量约64.6 KDa的大蛋白，对于寡肽底物一般最大可达到1U切500 ug。
应用案例：
产品应用
1、融合多肽和蛋白生产工艺中去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，保障重组融合蛋白准确的N端序列。如DDDDK是八肽Flag标签(DYKDDDDK)的一部分。rEK的使用可以轻松去除融合蛋白的Flag标签，是研究天然蛋白质结构和功能的理想工具。同时，为天然蛋白质序列的放大生产，也提供了便利和保障。
2、生物制药领域常用于GLP-1类似物多肽类药物的生产制备，如司美格鲁肽、利拉鲁肽等。
肠激酶酶活测试：
图1. 翌圣肠激酶（20395ES）与竞品N的酶切效果一致。
备注：阳性底物（20391ES）是一种通过DDDDK（肠激酶识别切割位点）连接两段特定蛋白序列所构成的融合蛋白，其整体分子量约为64.6 kDa，能够被肠激酶特异性切割成两个独立的蛋白片段，其分子量分别约为27.9 kDa和36.6 kDa。本品作为肠激酶底物，可以用于重组或天然肠激酶的半定量或定性酶活性检测。
储存条件：
-15~-25℃保存，有效期2年。
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的温度。在18°C，选择优化的蛋白质表达条件，这可能会增加表达蛋白质的溶解度。故障排除尝试较低的生长温度和较低的诱导剂浓度可以避免包涵体的形成，并有助于一些不正确的二硫键形成和疏水蛋白的情况。为了保护蛋白质，我们可以在培养后向培养基中加入蛋白酶抑制剂，并在冰上破碎细胞以避免降解。在大肠杆菌裂解物中在天然条件下的蛋白质纯化Trx•Tag™是移植到重组蛋白上的肽序列，可以通过肠激酶去除。这种蛋白质标签是一种增稠标签，可以帮助蛋白质正确折叠并防止它们沉淀。由重组pET-32α（+）载体表达的融合蛋白也含有
（fine）的上样量大约为柱体积的30-35%，有轻微的纯化作用，有时候可以去除一些电泳上看不到的小分子杂质。 在酶切之前，本例也做过Q柱吸附纯化融合蛋白试验，吸附没问题，也能做到进一步的纯化。只是后来在工艺整合过程中发现此步不是必需的，就省略掉了。 （4）肠激酶酶切 酵母表达的重组牛肠激酶，酶切用量每16mg融合蛋白用肠激酶1个单位，酶切体系为pH8.0，20mM PB，酶切温度35-37℃，酶切时间16小时。 点评：商品化的肠激酶有多种，有生化提取的，有重组大肠杆菌的，还有就是重组
（fine）换液 pH8.0，20mM PB做缓冲液置换。更换Chelating柱洗脱融合蛋白的溶液体系，使得适合肠激酶酶切的要求。 点评：Sephadex G-25（fine）的上样量大约为柱体积的30-35%，有轻微的纯化作用，有时候可以去除一些电泳上看不到的小分子杂质。 在酶切之前，本例也做过Q柱吸附纯化融合蛋白试验，吸附没问题，也能做到进一步的纯化。只是后来在工艺整合过程中发现此步不是必需的，就省略掉了。（4）肠激酶酶切 酵母表达的重组牛肠激酶，酶切用量每16mg
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