人外周血CD14+单核细胞分离试剂盒（阳选）

产品描述

单核细胞是机体最重要的免疫细胞类型一，在人外周血中的含量占约5%~10%，人外周血单核细胞分离试剂盒可通过阳性分选法从人外周血中分离纯化出单核细胞，纯化后可用于进一步进行培养扩增或者直接进行RT-qPCR、Western blot、流式细胞术等各种免疫学实验。

 

适用范围

本试剂盒适用于分离人外周血中的单核细胞。

 

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为6个月。

 

试剂盒组成信息

表1. 试剂盒组成信息(10/20/50t)

产品名称	产品规格	储存条件
人外周血单核细胞阳性分选抗体	20 μL	2-8°C 6 个月
	40 μL	2-8°C 6 个月
	100 μL	2-8°C 6 个月
人外周血单核细胞阳性分选磁珠	100 μL	2-8°C 6 个月
	200 μL	2-8°C 6 个月
	500 μL	2-8°C 6 个月

 

分离步骤

1.使用人外周血单个核细胞分离液分离出高活力的PBMCs(10 ml外周血可取得1-2×10⁷个单个核细胞)。

2.将细胞重悬于分选Buffer中，调整细胞密度为1×10⁸ cells/mL(分选Buffer为含有2 mM EDTA和1% BSA 的PBS，使用前需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌)。

3.取100 uL细胞悬液加入2 μl 单核细胞分选抗体混合均匀，4°C 孵育15 min，期间每隔5 min轻弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

4.孵育完成后加入1 mL分选Buffer重悬，500 g，离心5 min，弃去上清，加入100 μL的分选Buffer重悬。

5. 吸取10 μl 链霉亲和素磁珠，将磁珠与细胞混匀，混匀后4°C孵育10 min，期间每隔5 min轻弹管壁使细胞和磁珠混合均匀(此试剂盒说明书为分选1×10⁷个PBMC中的单核细胞的使用说明，如果分选更多的细胞，则可按比例增加抗体、链霉亲和素磁珠的用量，少于1×10⁷个细胞则将细胞悬液体积补至100 μl，加入2 μl 抗体和10 μl 链霉亲和素磁珠)。

6. 孵育完成后，加入1 ml的分选Buffer重悬，500 g，离心5 min，去除上清，加入500 μL分选Buffer重悬，准备磁性分选。

7.将分选柱放入磁场中，加入500 μL分选Buffer润洗柱子。

8.将重悬好的细胞悬液缓慢加入分选柱中，注意不要产生气泡，待分选柱中的液体流尽时再次加入500 μL分选Buffer清洗两次，流出的液体即为未结合磁珠的细胞。

9.将分选柱从磁场中移出，置于合适的离心管中，吸取1mL分选Buffer加入分选柱，使用配套的活塞将结合在分选柱上的细胞推出，收集推出的细胞即为目标细胞。

 

分选效果

对使用本试剂盒分选前后的人外周血中的单核细胞进行流式细胞分析检测显示，分选前后的单核细胞纯度分别为20.69%和96.60%。

注意事项

1.磁珠和抗体混合液使用和保存过程中均应避免冷冻、高速离心等操作。

2.操作过程应在无菌环境下进行，必须保证操作过程中使用的所有容器及所有直接接触细胞液的器具严格无菌。

3.本产品需要与磁力架配套使用。

4.本产品仅供科研使用。