qubit4.0

经验优化与高级技巧篇

1. Qubit 定量与紫外分光光度计定量的区别 在常规实验室对核酸定量的检测中，常会用到紫外分光光度计（或 Nanodrop）和 Qubit 两种检测方法，二者在原理、准确性、操作难易等方面存在显著差异。 ①首先两者原理不同，紫外分光光度计基于核酸的紫外吸收特性来实现对核酸的定量：核酸（DNA/RNA）在 260nm 波长处有特异性吸收峰，且吸光度与核酸浓度成正比；Qubit 基于荧光染料与核酸特异性结合的原理来实现对核酸的定量，两者结合后荧光强度与核酸浓度成正比，通过标准曲线校准实现定量

告别弥散拖尾！解锁高颜值RNA电泳条带｜结合领骏生物磁珠法RNA试剂盒实操指南

500 ng。 领骏试剂盒洗脱得到的 RNA，先用 Nanodrop/Qubit 测定浓度，浓度高用试剂盒配套无酶水洗释，不要盲目加大上样体积。过载直接造成条带肥胖、融合、拖尾；上样量过低，条带微弱看不清。普通胶孔上样总体积尽量≤7 μL。 样本做变性预处理：非变性电泳，70 ℃加热 1‑2 min，迅速冰浴，打开 RNA 二级结构；变性胶按照体系添加甲醛、甲酰胺；样本与 RNA 上样缓冲液充分混匀。 点样枪头不要戳破胶孔底部，减少 RNA 室温暴露时间； 电压控制5‑

干货| CUT and Tag 技术全方位解答

片段。 8. CUT&Tag 实验完成后，怎么进行质控？ 可以用 Qubit 进行浓度检测，Agilent2100 等可以检测片段分布的仪器进行文库峰型检测（如果研究组蛋白修饰，可以得到梯状条带分布）。如果没有检测片段分布的仪器，可以考虑使用 2% 的琼脂糖凝胶电泳代替，但是灵敏度会低，组蛋白修饰实验也有可能看不到典型的梯状条带。如果做转录因子，上机之前可以根据 ChP-seq 数据库里面的 peak 设计引物检测与 GAPDH 等内参位点对照，通过 qPCR 来确定目的靶点的富集程度