小鼠碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)ELISA试剂盒

由江蓝纯生物提供的小鼠碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据，因检测样本的不同会有所调整，实际数据以随货说明书为准，提供第三方检测服务，一站式实验服务使科研者工作更轻松、更快捷，并且能够为客户控制和降低各种成本，为客户的研究助力加油。
实验所需实验用品
1）能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪。
2）移液器及枪头、加样槽。
3）3.37℃恒温箱或水浴锅。
4）准备试剂用的试管、离心管、量筒等。
5）蒸馏水或去离子水。
6）涡旋振荡器、微孔板振荡器。
操作步骤
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。 
1、按说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。 
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，0 值孔加 样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。
4、除空白孔外，标准品孔、0 值孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100 μL。
5、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光孵育 60min。 揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20S，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干，如此重复 5 次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡 30s 的 程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
提 示：(为获得理想的实验结果，必须彻底移除残留液体。洗板完成之后，请立即进行下步操 作，不要让微孔板干燥) 
6、重复步骤4
7、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应 板，37℃水浴锅或恒温箱避光孵育 15min。 
8、所有孔加入终止液 50μL，在 450nm 波长酶标仪上读取各孔吸光度(OD 值)。
检测实验的局限性
本试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用或替换使用。如果样品产生的值高于最高标准，则用测定稀释剂进一步稀释样品，并重复测定。稀释剂、实验员、移液技术、洗涤技术、培养时间或温度以及试剂盒使用年限的任何变化都可能导致结果变化。样本采集、处理和存储的变化可能会导致样本值的差异。本试剂盒实验设计消除了不同生物样品中可能潜在的干扰因素的影响，但并不能涵盖所有潜在影响因素。不能排除存在其他干扰的可能性。
简介
碱性成纤维细胞生长因子(FGF2； bFGF)是一个蛋白质编码基因。该基因所编码的蛋白是成纤维细胞生长因子（FGF）家族的一个成员。FGF家族成员与肝素结合，具有广泛的有丝分裂和血管生成活性。该蛋白与不同的生物过程有关，如肢体和神经系统发育、伤口愈合和肿瘤生长。
试剂盒组成及储存条件

注意事项
1. 混合蛋白质溶液时，应始终避免起泡。为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外，每种试剂应单独使用容器。
2. 确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板膜。
3. 当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。
4. 显色剂应保持无色，直到添加到板中，确保显色剂不受光线照射，显色剂应从无色变为蓝色。
5. 应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。
6. 此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。
7. 该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
8. 显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
9. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。洗涤液/稀释液配置：如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从4ng/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至200pg/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的200pg/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将200pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为:  200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL、12.5pg/mL、6.25pg/mL、3.125pg/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。

抗体工作液配置
使用前10分钟，将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。
抗体工作液配置
使用前10分钟，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。
备 注：如待测样本中FGF2浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

线性关系
分别在选取的4份健康小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度FGF2，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为1.56pg/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组小鼠FGF2。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
有效期
180天