小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA检测试剂盒

小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA检测试剂盒

货号：2M-KMLJM219582m　品牌：CAMILO　规格：96T

产品概述

本试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液及组织等样本中的BMP-4，也可用于经验证的其他液体类科研样本。产品仅供科研使用，不用于临床诊断。样本浓度超出标准曲线范围时应先进行适当稀释。

检测原理

采用双抗体夹心 ELISA 法。所提供的 ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS 或 TBS 洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过 PBS 或 TBS 的彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

性能参数表

适用样本

适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清，以及尿液、腹水、脑脊液等液体类样本。血清：全血4℃静置过夜后1000-3000rpm离心10分钟取上清；血浆：用EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝后1000-3000rpm离心10分钟取上清；组织匀浆：按1g组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂冰水匀浆，5000-10000rpm离心10分钟取上清；细胞培养上清及尿液、腹水、脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟取上清。暂不检测时可于-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。样本应清澈透明、避免溶血与高脂，不能及时检测时按单次用量分装冻存，避免反复冻融；浓度可能超出标准曲线时应先做预实验确定稀释倍数。

操作流程简述

1. 从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂放回铝箔袋内封存于2-8℃；
2. 预留空白孔（若使用双波长读板，空白孔可以不设）；
3. 分别将标本或不同浓度BMP-4标准品（0孔加标准品稀释液）加入相应孔中（100μl/孔），用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育90分钟；
4. 提前30分钟制备生物素化BMP-4抗体工作液；
5. 洗板2次；
6. 加入生物素化BMP-4抗体工作液（100μl/孔），封板后37℃孵育60分钟；
7. 提前30分钟制备酶结合物工作液，室温避光放置；
8. 洗板3次；
9. 除空白孔外加入酶结合物工作液（100μl/孔），封板后37℃避光孵育30分钟；
10. 洗板5次；
11. 加入TMB显色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃避光孵育，当标准曲线高浓度颜色较深、有明显颜色梯度时即可终止，显色反应请勿超过30分钟；
12. 加入终止液（包括空白孔）100μl/孔，混匀后即刻测量OD（450nm）值（10分钟内）。

结果计算方式

每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值；以标准品浓度作横坐标、OD值作纵坐标绘制平滑标准曲线，通过标本OD值查出其浓度，推荐使用curveexpert1.3等专业软件拟合；若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时乘以稀释倍数。

注意事项

• 试剂盒使用前请保存在2-8℃，除复溶后的标准品外其他成分不可冻结。
• 浓缩生物素化抗体、浓缩酶结合物体积小，使用前请甩几下或1000rpm离心1分钟使液体沉积管底。
• 浓洗涤液可能有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，结晶完全溶解后再配制洗涤液。
• 冻干标准品为一次性使用，不得分装；因其浓度较低，溶解两小时后会迅速失活。
• 操作严格按说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
• 配制试剂需用旋涡混合仪混匀，加入孔内的试剂充分混匀对结果尤为重要。
• 酶标仪使用前应充分预热并按规范操作。
• 标准品和样本检测时建议作复孔。
• 不用的微孔板应放回原铝箔袋中，置2-8℃保存。
• 显色液对光敏感，应避免直接暴露在光线下。
• 超过有效期的试剂盒不能用于实验。
• 结果判定以酶标仪读数为准；双波长检测时波长设置为450nm和630nm。
• 所有样品、洗涤液和废弃物按生物废弃物处理；终止液为2M硫酸，使用时注意安全。
• 各步骤加样均应使用加样器并经常校准；一次加样时间最好控制在5分钟内。
• 每次试验同时做标准曲线；标本含量过高时先稀释再测定，计算时乘以总稀释倍数。
• 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。
• 洗板时每孔注液量不少于350μl，注意检查加样头是否堵塞，防止孔间污染。
• 用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值。
• 复孔实验结果计算取平均值。
• 标本溶血可能导致假阳性，溶血标本不宜进行此项检测。
• 试验时将加过样品的板条放于密闭盒内，保持湿度约60%。
• 恒温箱温度应经常校准，确保实验温度保持37℃恒定。
• 48T试剂盒所有组分均为96T的50%量。

说明书/性能数据

Cat No.：2M-KMLJM219582m，规格96T，检测波长450nm，样本体积50-100μl，反应时间4-5h。该货号厂家暂未公开PDF说明书，检测范围、灵敏度、批内差、批间差、回收率等性能数据请以咨询结果为准；以下组成与操作内容按本品牌双抗体夹心ELISA试剂盒通用要求整理，具体以随盒说明书为准。

FAQ

Q1：该试剂盒的检测范围和灵敏度是多少？
该货号厂家页面未公开检测范围与灵敏度数据，具体性能参数请咨询后确认。

Q2：为什么建议设置复孔？
复孔可及时发现加样或洗板偏差，提高结果可靠性，计算时取复孔平均值。

Q3：终止后应在多长时间内读数？
加入终止液混匀后应立即测量，并在10分钟内完成450nm OD值读取。

Q4：样本可以反复冻融吗？
不建议。样本应按单次使用量分装冻存，避免反复冻融导致目标因子降解。

试剂盒组成

试验所需自备试验设备和器材

• 酶标仪（450nm检测波长，570nm或630nm校正波长）
• 洗板机（每孔注液量350μl且不溢出）
• 超净工作台/生物安全柜/通风柜
• 高精度单道加液器（0.5-10μl、2-20μl、20-200μl、200-1000μl）
• 高精度多道加液器（8道或12道，50-300μl）
• 37℃恒温箱
• 低温离心机
• 冰箱（4℃、-20℃、-86℃）
• 分析天平
• 漩涡混合仪与低频振荡器

试验所需自备试验耗材及试剂

• 离心管（1.5ml、5ml等）
• 一次性吸头（0.5-10μl、2-20μl、20-200μl、200-1000μl）
• 纯净水或蒸馏水
• 坐标纸
• 吸水纸
• EDTA、枸橼酸钠、肝素等抗凝剂

标本收集注意事项

• 收集血液的试管应为一次性无热原、无内毒素试管
• 血清和血浆应避免溶血、高血脂标本
• 标本应清澈透明，悬浮物需离心去除
• 标本收集后若不及时检测，按一次使用量分装冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融
• 可根据标本实际情况做适当倍数稀释，建议先做预实验确定稀释倍数
• 收集标本尽量做到双份用量，避免重复实验时标本缺失
• 收集标本时做好防护（手套、口罩、护目镜等），视所有标本为潜在危险
• 样本处理应在生物安全柜内进行并正确使用

检测前准备工作

1. 提前20分钟从冰箱取出试剂盒，平衡至室温后方可试验；
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水按1:25稀释，未用完放回；
3. 标准品：加入标准品稀释液1.0ml至冻干BMP-4标准品中，静置10分钟充分溶解后轻轻混匀（具体浓度见随盒说明书），在管身标注①后按需稀释；务必保证冻干标准品彻底溶解混匀；
4. 标准品稀释：取7支洁净试管标注②-⑧，每管加300μl标准品稀释液，从①管取300μl加入②管，混匀后依次倍比稀释至⑦管，⑧管为标准品稀释液作阴性对照；复溶后的标准品原液请废弃，不可重复使用；
5. 生物素化BMP-4抗体工作液：用抗体稀释液按1:100稀释浓缩生物素化抗体，使用前30分钟配制，仅供当日使用；
6. 酶结合物工作液：用酶结合物稀释液按1:100稀释浓缩酶结合物，使用前30分钟配制，室温避光放置，仅供当日使用；
7. TMB显色工作液：使用前30分钟按显色液A 9份加显色液B 1份（9:1）配制。

洗涤方法

• 自动洗板机：每孔注入洗涤液350μl，注入与吸出间隔20-30秒，熟练操作后再用于实验；
• 手工洗板：每孔加洗涤液350μl，静置30秒后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，注意加液过程中不要造成孔间污染，避免跳孔。

操作程序总结

准备试剂、样品和标准品 → 加入样品和标准品，37℃反应90分钟 → 洗板2次，加入生物素化抗体工作液，37℃反应60分钟 → 洗板3次，加入酶结合物工作液，37℃反应30分钟 → 洗板5次，加入TMB显色液，37℃避光反应 → 加入终止液 → 10分钟之内酶标仪测OD值 → 计算标本待测因子含量。

参考曲线

本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘制的标准曲线来计算标本含量。