鸡大肠杆菌抗体（E-coli Ab）ELISA检测试剂盒

鸡大肠杆菌抗体（E-coli Ab）ELISA检测试剂盒

用途：科研检测，用于鸡血清 / 血浆中大肠杆菌特异性抗体定性、定量检测，评估鸡群大肠杆菌感染、疫苗免疫后抗体水平；不可用于动物临床诊断

中文名称：鸡大肠杆菌抗体（E-coli Ab）ELISA检测试剂盒
检测对象：鸡抗大肠杆菌抗体（E‑coli Ab）
检测方法：夹心法
规格：48T、96T
检测样本：鸡血清、血浆，少量可用于组织浸出液
上样体积：50 μL（样本孔）
读板波长：酶标仪 450 nm
储存条件：2‑8℃冷藏，禁止冷冻
有效期：6 个月
总实验时长：约 2‑2.5 h

检测原理
微孔板预先包被纯化大肠杆菌抗原；加入待测鸡血清样本，样本中抗大肠杆菌特异性抗体与固相抗原结合；洗板去除未结合物质；加入 HRP 标记抗鸡 IgG 二抗，形成**抗原‑鸡抗体‑HRP‑二抗**复合物；洗涤后加入 TMB 底物显色，HRP 催化底物变为蓝色；加终止液转为黄色；450 nm 读取 OD 值，OD 高低与样本中大肠杆菌抗体含量正相关，结合阳 / 阴性对照判定阴阳性，可做半定量抗体效价评估。

试剂盒组分
1. 预包被大肠杆菌抗原酶标板
2. 阳性对照血清、阴性对照血清
3. 样本稀释液
4. HRP 标记抗鸡 IgG 酶结合物
5. 20× 浓缩洗涤液
6. TMB 显色液（A 液 + B 液）
7. 终止液（2M H₂SO₄）
8. 封板膜、说明书

简要操作流程
1. 试剂回温至室温，浓缩洗涤液按比例稀释为工作液
2. 设置空白孔、阳性对照、阴性对照、样本孔；样本用样本稀释液适度稀释，每孔 50 μL；封板 37 ℃孵育 60 min
3. 弃液洗板 3‑5 次，拍干
4. 加入 HRP 酶结合物 100 μL / 孔，37 ℃孵育 60 min
5. 洗板，拍干
6. 加入 TMB 显色液，避光 37 ℃显色 10‑15 min
7. 加入终止液 50 μL / 孔终止反应
8. 酶标仪 450 nm 测 OD 值，按 Cut‑off 值判读阴阳性，计算抗体水平

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。